植物雌激素对去势雌大鼠缺血脑组织c fos表达的影响

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1、植物雌激素对去势雌大鼠缺血脑组织Cfos表达的影响【关键词】脑缺血植物雌激素类Cfos细胞凋亡0引言研究表明,cfos基因表达与细胞凋亡关系密切，Cfos表达的强弱与缺血状态下的组织细胞损伤的程度正相关.我们通过观察动物雌激素和植物雌激素对去势雌大鼠永久的局灶脑缺血后不同时间段的Cfos表达的影响，进一步探讨植物雌激素对缺血脑组织的保护机制.我们应用葛根素作为植物雌激素的代表，它的化学结构是8D吡喃葡萄糖4，7二羟基异黄酮苷，属植物雌激素中异黄酮类.1材料和方法1.1材料动物雌激素选用美国Sigma公司的17Beta雌二醇，葛根素由山东鲁银制药有限公司生产，C

2、fos多克隆抗体及Cfos蛋白免疫组化试剂盒和DAB染色剂购自武汉博士德生物制剂公司.1.2方法1.2.1模型建立成年雌性SD大鼠90只，3~4mo龄，体质量230～260g,购自哈尔滨医科大学实验动物中心.所有动物制作脑缺血模型前1L/kg).然后用改良的Loga［1］法行永久性右侧大脑中动脉阻断模型.动物随机分成3组：空白对照组，雌激素组，葛根素组，每组30只.雌激素组腹腔注射17Beta雌二醇1g/kg)，葛根素组腹腔注射葛根素1g/kg),空白对照组不给予任何药物.1.2.2标本采集3组大鼠按大脑中动脉阻断的时间各分为8h组，16h组，24h组.在相应时间点将大鼠断

3、头取脑，将脑组织切除脑干，其余脑组织冠状平均切成5等分，取中间的切片（约距额极4~7mm）.然后用40g/L的多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，石蜡包埋，制成蜡块，切成厚约4μm的薄片.1.2.3标本检测ABC免疫组化法检测Cfos蛋白的表达.切片常规脱腊至水，灭活内源性酶，热抗原修复滴加1∶100稀释的兔抗Cfos抗体，4℃过夜，滴加生物素化羊抗兔IgG，滴加试剂SABC，DAB显色，苏木素轻度复染.Cfos阳性细胞计数方法：在各样本相同部位，在缺血侧梗死灶边缘区选择5个不重叠的视野，计数每个视野下每100个细胞中阳性染色的细胞数.然后再除以5，所得的数据作为一个标本的Cf

4、os表达的阳性细胞数.统计学处理：上述数据均经SPSS10.0统计软件处理，用x±s表示，采用多因素方差分析方法进行显著性检验.2结果不同预处理组在永久的右侧的大脑中动脉阻断后8，16，24h三个时间点缺血脑组织都有大量的Cfos的表达，阳性细胞广泛分布在缺血侧的新皮层、远离梗死灶的海马、扣带回及部分丘脑.梗死灶中心未见阳性表达，梗死灶周围的半暗带区有较强的表达，未见缺血侧纹状体区域有Cfos蛋白的表达.在脑缺血后8h,对照组,雌激素组和葛根素组Cfos阳性细胞数分别是20.3±0.8，19.4±0.6，和19.6±0.5,对照组与用药组之间两两比较,差异无统计学意义(P

5、＞0.05).而对照组Cfos阳性细胞数在缺血后16h达高峰(40.9±1.3)，与8h相比差异显著（P<0.05）.雌激素组和葛根素组在16h时Cfos阳性细胞数与8h时相比,差异无统计学意义.16h,雌激素组和葛根素组相比,Cfos阳性细胞数分别是21.3±1.0和21.4±0.6,差异亦无统计学意义(P＞0.05).在24h时间点，对照组Cfos阳性细胞数与16h相比略有减少，为32.9±1.27，而雌激素组和葛根素组Cfos的表达阳性细胞数分别是24.3±1.5和23.5±1.0,与16h时间点相比稍有增多.在16h及24h时间点,两处理组与对照组相比，

6、Cfos的表达明显减弱（P<0.05），而雌激素组和葛根素组之间相比较差异无统计学意义.各处理组不同时间点Cfos蛋白的表达见图1.3讨论　　脑缺血后形成脑梗死的过程中，细胞发生了两种方式的死亡：即梗死中心的急性细胞死亡和梗死周边A：脑缺血后8h;B：对照组脑缺血后16h;C：雌激素组和葛根素组脑缺血后16h;D：对照组脑缺血后24h;E：雌激素组和葛根素组脑缺血后24h.图1各组动物脑缺血后不同时间点梗死周围半暗带区Cfos蛋白的表达半暗带区的细胞凋亡.后者的发生需要时间和能量的动态过程，它的发生较坏死缓慢，持续时间长.即刻早基因cfos基因正是与这一过程相关的

7、一种转录调节因子.Cfos基因表达的机制是通过N甲基D天冬氨酸（NMDA）受体介导的，并随谷氨酸释放的增多而上升［2］.另外细胞内钙离子的增加，也可诱导神经细胞cfos的表达.而已有研究证实17beta雌二醇可通过NMDA受体，抑制谷氨酸的释放，并可减少神经细胞内兴奋性氨基酸的含量.另外它还可抑制钙超载.因此，推测雌激素可通过上述途径下调cfos基因的表达，抑制细胞的凋亡，本实验表明雌激素发生作用的主要部位是在非梗死区的扣带回皮层.　　早在1991,就有学者报道大鼠（雌、雄）局