htert反义寡核苷酸对hl

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1、hTERT反义寡核苷酸对HL作者：孙玲，王峰，孙慧，乐晓萍，葛秀峰，姜中兴，张钦宪【摘要】　　为了研究hTERT基因反义寡核苷酸（ASODN）对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用，并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系，应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达，RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况，倒置显微镜观察细胞形态变化，MTT法检测细胞增殖状态，应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现：反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后，hTERT基因表达明显受抑，细胞生长受抑，增殖能

2、力减弱，其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示：反义寡核苷酸10、20和30μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39，0.944±0.16，与未作用组（2.648±0.42）比较，差异有显著性（P<0.05）；正义寡核苷酸20μmol/L作用组（OD450-690值为2.376±065）与未作用组比较，差异无显著性（P>0.05）。TRAP-PAGE检测表明：hTERTASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少，以30μmol/L作用组条带最少。结论：hTERT基因反义寡核苷酸能够

3、通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖，下调端粒酶活性。【关键词】HL-60细胞；hTERT；反义寡核苷酸；端粒酶活性　　InhibitionofhTERTAntisenseOligodeoxynucleotideonProliferationandTelomeraseActivityinHL-60Cells　　AbstractThisstudyeraseactivityinHL-60cellsandtoexploretherelativitybeteraseactivityandtheexpressionofhTERTgeneinHL-60cells.Af

4、tertreatedbyhTERTASODNtheexpressionofhTERTorphologicalchangesofHL-60cellsicroscopy，thecellproliferationeasuredbyMTTmethod，andthetelomeraseactivityinede.OD450-690valuesol/LASODNfor72hours.Thedifferenceol/Lgroupsol/LASODNgrouprespectively(P<0.05)，butthedifferenceol/LSODNgroup(2.376±0.65)

5、eraseimagebandsol/L.ItisconcludedthatthehTERTASODNmayinhibittheproliferationanddoeraseactivityinHL-60cellsbysealingtheexpressionofhTERTgene.　　Keyeraseactivity端粒是真核细胞染色体末端特有的保护性结构，它能维持染色体末端的完整性。随着细胞的分裂、分化，端粒逐渐缩短，当端粒缩短至一定程度，细胞将出现衰老、死亡。端粒酶是一种逆转录酶，它能合成端粒并接到染色体末端，补充由于DNA分裂造成的端粒缩短，从而维持端粒长度，使细胞永

6、生化［1］。研究表明：端粒酶活性增高与许多肿瘤的发生密切相关，在急性白血病中存在端粒酶的高表达［2］。人们普遍认为，端粒酶活化是肿瘤细胞无限增殖的必要条件。抑制端粒酶的活性可以达到抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡的目的。人类端粒酶逆转录酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTRET）基因与端粒酶活性具有直接相关性［3］。我们利用反义技术将hTERT反义寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotide，ASODN）导入人类髓性白血病细胞株HL-60细胞，探讨其对白血病细胞的增殖及端粒酶活性的影响，为开辟白血病治疗

7、新途径提供有价值的实验室资料。　　材料和方法　　细胞培养　　HL-60细胞为郑州大学医学院组胚教研室保存株，采用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液，将HL-60细胞置37℃、5%CO2、饱和湿度的恒温孵箱中培养。实验选用对数生长期细胞，细胞悬浮成团，生长良好，隔天换液并传代1次，成活率>95%。　　反义核酸的设计与合成　　选择端粒酶hTERTmRNA转译起始区作为靶点合成全硫代修饰的反义寡核苷酸（ASODN）片段；另设正义全硫代修饰的寡核苷酸（SODN）片段作为对照。合成序列如下：h-ASODN:5’-GGAGCG