基因工程03264

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1、在4月15日考试之前自学内容：第二章细胞根据P101《学习提要》第二篇植物生物学根据P208《学习提要》第三篇动物生物学考试之前把习题集上的十套试卷做完。15．过夜的韭菜不能吃，是因为会产生大量的亚硝酸盐。亚硝酸盐危害健康是因为它在体内（）A．导致酶和蛋白质的变性B．导致DNA的损伤，诱发细胞癌变C．破坏细胞膜的结构D．阻断呼吸链上的电子传递2009年初赛P习题集15基因工程（重组DNA技术）一、概念（高中课本）将从一个生物体内分离得到的或人工合成的目的基因导入另一个生物体中，使后者获得新的遗传性状或表达所需要的产物的技术。基因工程又叫遗传工程、重组DNA

2、技术、分子克隆或基因克隆。第一节、基因工程的概念和内容供体细胞目的基因（1）目的基因的分离、获取和制备二、基本流程P奥赛经典549限制性内切酶目的基因（2）目的基因和载体连接成重组DNA分子（3）重组DNA分子导入受体细胞受体细胞重组质粒（5）目的基因的表达（4）阳性克隆的鉴定和筛选第二节基因工程的工具酶一、限制性内切酶（限制酶）概念能识别DNA分子中特异性核苷酸序列并由此特异切割DNA双链结构的水解酶。在DNA分子内部切割，水解磷酸二酯键。其识别序列往往呈回文结构。2.命名（自己看）（补充）修饰酶修饰酶：修饰宿主自身的DNA，使之打上标记。如果两条链均已

3、甲基化，则不发生反应。对于半甲基化的DNA，可使未甲基化的链甲基化。如果识别位点上两条链均未甲基化，则该DNA将被限制酶切割。3.限制酶的分类Ⅰ类：序列外随机切割，基因工程中不用。Ⅱ类：序列内特异切割，回文结构，基因工程中常用。Ⅲ：序列外特异切割，非回文结构。基因工程中特殊时候使用。TTCGAAAAGCTT5’3’3’5’CCTAGGGGATCC5’3’3’5’HindⅢBamHⅠ4.Ⅱ类限制酶的特点（1）每一种酶都有各自特异的识别序列识别序列通常为4、5或6个碱基对（bp）basepair=bp（2）识别序列为回文结构TTCGAAAAGCTT5’3’3’

4、5’HindⅢ（3）在识别序列内（大多数酶）或两侧切割HindⅢGTTTCGACAAACAAGCTTGT少数酶的切割位点在识别序列的两侧EcoRⅡ：5’……↓CCAGG……3’末端类型平头末端黏性末端5’突出末端（更常见）3’突出末端SmaⅠGCCC5’3’GGGGCCCG3’5’GCTGCA5’3’ACGTCG3’5’PstⅠTTCGAA5’3’AAGCTT3’5’HindⅢ3’突出末端5’突出末端5.同裂酶和同尾酶同裂酶：识别序列和切割位点均相同的酶。同尾酶：识别序列不同但切出的DNA片段具有相同的末端序列。CCTAGG5’3’GGATCC3’5’Ba

5、mHⅠTCTAGA5’3’AGATCT3’5’BglⅡ2009年江苏省初赛P习题集3880．能够识别DNA特殊序列的核酸水解酶是：A．DNA酶B．限制性内切酶C．核酸外切酶D．磷酸二酯酶答案：B14．下图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ和BglⅡ的识别序列：切割出来的DNA黏性末端可以互补配对及正确的末端互补序列是（）A．BamHⅠ和EcoRⅠ；末端互补序列一AATT一B．BamHⅠ和HindⅢ：末端互补序列一GATC一C．BamHⅠ和BglⅡ：末端互补序列一GATC—D．EcoRⅠ和HindⅢ；末端互补序列一AATT一2008年初赛第14题

6、P习题集492010年初赛第58题P习题集1358．限制性内切酶SalⅠ识别的序列是GTCGAC，酶切后在5’-侧产生4个碱基突出，限制性内切酶XhoⅠ识别的序利是CTCGAG，酶切后也在5’-侧产生4个碱基突出。如果将SalⅠ酶切过的插入片段与XhoⅠ酶切过的质粒载体混合，再进行连接反应，那么产生的连接产物所具有的性质是：A．使用SalⅠ或XhoⅠ处理，插入物都会释放出来B．SalⅠ处理可以使插入物释放出来，但XhoⅠ不行C．XhoⅠ处理可以使插入物释放出来，但SalⅠ不行D．无论使用SalⅠ或XhoⅠ处理，插入物都不会释放出来既能连接黏性末端，也能连接

7、平头末端。二、DNA连接酶GCTGCA5’3’ACGTCG3’5’在3’-OH和5’-磷酸基团之间形成磷酸二酯键。三、DNA聚合酶（P554）四、其他的酶第三节基因工程的载体P555载体：运载外源DNA分子有效地进入受体细胞的工具。载体必需满足的条件：有多种限制酶的切点，每种酶最好只有一个切点；能在受体细胞中自我复制；有便于选择的标记基因（如四环素抗性基因）；具有促进外源DNA表达的调控区（如强启动子）；使用安全。一、质粒载体质粒是多种细菌中发现的染色体外的遗传因子。它是闭合环状双链DNA分子，能自主复制。含有某些基因，如抗药性基因，对寄主的生长有利。二、

8、噬菌体载体三、柯斯质粒载体（含有λ噬菌体cos位点的质粒）四、人工