hbv感染胎盘中il6 mrna的表达及作用

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1、HBV感染胎盘中IL6mRNA的表达及作用江红秀，韩国荣,吴引伟,张永成【摘要】目的：　探讨白细胞介素6（IL6）mRNA在HBV感染胎盘中的表达情况。方法：临床上选取HBsAg(+)且HBVDNA（1～3）×108copies·ml-1孕妇60例,应用免疫组化SP方法检测其胎盘上HBsAg、HBcAg,根据HBsAg和（或）HBcAg是否表达分为胎盘感染组及非感染组,应用ELISA及RTPCR方法检测两组孕妇分娩前血清IL6水平及分娩时胎盘IL6mRNA表达。结果：胎盘感染组42例,非感染组18例。胎盘感染组宫内感染率15/42(35.7%),非感染组宫内感染率1/

2、18(5.56%),两组之间有显著性差异（χ2=4.38,P＜0.05）。胎盘感染组胎盘局部IL6mRNA表达明显高于非感染组,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组血清IL6水平无统计学差异（P＞0.05）。结论：胎盘感染是HBV宫内感染的危险因素,胎盘局部IL6表达与胎盘HBV感染可能有一定的相关性。【关键词】　乙型肝炎病毒；白细胞介素6；胎盘感染；宫内感染近年来,多项研究[1]证实胎盘乙型肝炎病毒（HBV）感染是乙型肝炎（乙肝）宫内感染主要机制之一,而其具体机制目前尚未清楚。有研究表明[2],白细胞介素6（IL6）能够介导HBV对细胞的感染,并在一定程度上促进HB

3、V的感染及复制,但关于IL6与胎盘HBV感染之间的关系及其在宫内感染中的作用,目前研究尚少。本实验通过检测HBV胎盘感染与孕妇血清IL6水平及胎盘局部IL6mRNA表达之间的关系,从而为乙肝宫内传播机制的探讨提供一条途径和思路。1对象与方法1.1研究对象选择2007年3月至2008年1月在东南大学附属南京第二医院妇产科门诊产前检查HBsAg阳性且HBV　DNA在（1～3）×108copies·ml-1的孕妇60例。所选病例肝肾功能正常,无先兆早产及先兆流产史,无其它感染性疾病、传染性疾病、妊娠合并症及并发症,三维B超排除胎儿畸形,丈夫为非HBV携带者或乙肝患者,产前统一注

4、射高效价乙肝免疫球蛋白进行阻断治疗且未进行抗病毒治疗者。根据胎盘是否表达HBsAg和（或）HBcAg分为胎盘感染组及非感染组,两组孕妇年龄、孕产次、分娩方式及HBVDNA量无明显差异。60例孕妇共分娩新生儿60名。1.2标本的收集与处理采集足月孕妇分娩前新鲜血清约200μl,-70℃迅速保存。无菌取顺产或剖宫产孕妇胎盘母体面中央（避开钙化或坏死部分）大小约0.5cm×0.5cm×0.5cm胎盘组织,用0.9％NaCl漂洗干净后放入用DEPC水处理过的无菌EP管中-70℃冷冻保存。同时无菌采集1.5cm×1.5cm×2.0cm大小胎盘,包括母面至胎儿面各层,立即置于4％多聚甲醛固

5、定,常规石蜡包埋,制成4～5μm切片备检。1.3方法1.3.1孕妇及新生儿血清乙肝两对半（HBVM）及HBVDNA定量检测孕妇入院及新生儿出生后立即常规检测血清HBVDNA和HBVM。新生儿１个月时检测HBVM。HBVM采用化学发光法（Abott法）进行检测,HBVDNA定量采用荧光定量PCR方法,检测工作由东南大学附属南京第二医院检验科完成。1.3.2胎盘组织HBsAg及HBcAg的检测采用免疫组化SP法,鼠抗人HBsAg、HBcAg及免疫组化试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。操作严格按照说明书进行,同时设立阴、阳性对照。正常阴性对照：为血清乙肝标志物及HBVD

6、NA阴性的正常孕妇胎盘；空白对照：不加第一抗体,代之以抗体稀释液。阳性对照：HBsAg及HBcAg阳性肝组织切片。1.3.3血清IL6的ELISA检测ELISA试剂盒购自Ebioscience公司,具体实验步骤按照试剂盒说明进行操作。1.3.4RTPCR检测胎盘组织IL6mRNA组织RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司,RTPCR试剂盒购自Shpromega公司,合成引物购自南京金思特科技有限公司。按试剂盒说明书统一提取RNA,进行琼脂糖电泳观察RNA质量,紫外分光光度计测定其浓度及纯度。所用枪头和EP管均经过DEPC水处理以防RNA酶污染。按照说明书

7、具体步骤进行cDNA的第一链合成即逆转录过程，然后进行PCR扩增实验。IL6上游引物为5＇AATAACCACCCCTGACCCAA3＇,下游引物为5＇GACCAGAAGAAGGAATGCCC3＇,扩增产物片断为200bp。内参βactin上游引物为5＇AGCGAGCATCCCCCAAAGTT3＇,下游引物为5＇GGGCACGAAGGCTCATCATT3＇,扩增片断为285bp。取PCR扩增产物5μl于1％琼脂糖凝胶上进行电泳,在凝胶成像系统上扫描,并运用相关软件进行分析,