桦褐孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响

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1、桦褐孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响　　桦褐孔菌Fuscoporiaobiqua(Pers：Fr．)Aoshi，属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目(无褶菌目=多孔菌目，多孔菌科)、褐卧孔菌属(纤孔菌属)。桦褐孔菌在民间主要用于预防和治疗各种疑难杂症，如各种恶性肿瘤、糖尿病、心血管疾病、肝病及艾滋病等［1］。本实验从桦褐孔菌中提取多糖，应用溶血空斑实验和单核巨噬细胞吞噬功能实验观察了对小鼠免疫功能的影响。　　1材料　　1.1动物　　昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由延边大学医学部动物科提供。　　1.

2、2药品与试剂　　桦褐孔菌多糖的制备：将桦褐孔菌粉碎称重，加适量水浸泡，煎煮3次，过滤，合并滤液，浓缩；加入浓度95%乙醇使含乙醇量达80％，放置24h，过滤收集沉淀，用高浓度乙醇洗涤，干燥，再次醇沉，干燥后最终得褐色桦褐孔菌多糖。补体：取豚鼠新鲜血清，使用前加1ml沉积羊红细胞于20～30ml豚鼠血清中，置4℃吸附20min，离心取上清，用PBS液稀释成1∶5的补体。绵羊红细胞：取新鲜羊颈静脉血10ml装在500ml无菌的带有小玻璃珠的烧瓶中，20min后，用PBS液洗涤3次，配成含50%的绵羊红细胞的液体

3、。鸡红细胞：用生理盐水稀释鸡红细胞达到5%鸡红细胞悬液。固定液为1∶1丙酮-甲醇溶液。染色液：4%（v/v）Giemsa-磷酸盐缓冲液。　　2方法　　2.1对小鼠溶血空斑形成的影响取60只小鼠，随机分为6组，分别为生理盐水对照组及桦褐孔菌多糖50，100，200，400，800mg/kg5个剂量组，灌胃1次/d，共14d。给药后第10天每只小鼠用1∶200绵羊红细胞0.5ml腹腔注射进行免疫，继续灌胃4d后将小鼠处死，无菌取脾，按文献方法测溶血空斑形成实验［2，3］。　　2.2腹腔巨噬细胞吞噬功能检测取小鼠

4、20只，随机分为生理盐水组和桦褐孔菌多糖200mg/kg组，每组10只，给药方法同上，于实验前4d腹腔注射0.5%淀粉生理盐水溶液，每只小鼠0.5ml，4d后每只小鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5ml，12h后，处死小鼠；仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹膜注入生理盐水2ml，轻轻按揉鼠腹部1min，然后吸出腹腔洗液1ml，分滴于两片载玻片上，方入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。以生理盐水漂洗，以除去未与载玻片黏附的细胞，晾干。1∶1丙酮-甲醇溶液固定5min。4%（v/v）Gie

5、msa-磷酸盐缓冲液染色3min，流水冲洗，晾干［4］。　　3结果见表1～2。桦褐孔菌多糖200mg/kg组与生理盐水对照组相比较具有显著性差异（P<0.05）。桦褐孔菌多糖200mg/kg组的吞噬指数、吞噬百分率与生理盐水对照组比较均有显著性差异（P＜0.05）。表1桦褐孔菌多糖对小鼠溶血空斑的影响（略）表2桦褐孔菌多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的检测（略）　　4讨论　　桦褐孔菌多糖对正常小鼠溶血空斑的实验中，桦褐孔菌多糖200mg/kg组效果最好，说明桦褐孔菌多糖可以增强小鼠脾脏对绵羊红细胞的特异

6、性抗体生成细胞数的产生，对正常小鼠体液免疫功能具有促进作用。应用此剂量在对小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能实验结果表明桦褐孔菌多糖能够增强小鼠体内的巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬功能，具有明显的促进作用，说明桦褐孔菌多糖对小鼠的非特异性免疫功能具有明显增强作用，上述实验结果为临床应用桦褐孔菌多糖提供了一定的实验依据。　【参考文献】　　［1］赵芬琴，朴惠善.桦褐孔菌的研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2005，12（2）：69.　　［2］张庆镐，李英信，李红花.草苁蓉多糖对小鼠体液免疫功能的影响［J］.延边大学医学学报

7、，1999，22（1）：26.　　［3］朱立平，陈学清.免疫学常用实验方法［M］.北京：人民军医出版社，2003：137.　　［4］苗明三，方晓艳.芦笋多糖对正常小鼠免疫功能的影响［J］.中国医药学，2003，18（1）：52.