大孔吸附树脂纯化马钱子总生物碱的工艺研究

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1、大孔吸附树脂纯化马钱子总生物碱的工艺研究作者：管庆霞，王录娜,李永吉,杨志欣，王锐【摘要】　　目的研究大孔树脂纯化马钱子总生物碱的工艺条件，为马钱子总生物碱的工业化生产提供实验依据。方法以吸附量及解吸率为指标考察了AB-8,D101,HPD-500和LSA-10等4种型号的树脂,确定纯化马钱子总生物碱的最佳树脂。并通过单因素分析考察该树脂分离、纯化马钱子总生物碱的最佳工艺条件。结果AB-8型大孔吸附树脂对马钱子总生物碱具有较好的分离能力。通过大孔树脂分离纯化后,马钱子样品总生物碱的纯度可达70%,洗脱率可达到

2、90%以上。结论AB-8大孔吸附树脂综合性能较好,适合于马钱子总生物碱的分离纯化。【关键词】马钱子总生物碱大孔吸附树脂纯化　　马钱子为马钱科植物马钱Strychnosnux-vomicaL.的干燥成熟种子［1］，具有通络止痛、散结消肿的功效，在我国有悠久的药用历史，疗效显著、确切，为历代医家所推崇。现代研究证明其主要含总生物碱（其中最主要的成分为士的宁、马钱子碱）。因此,分离纯化马钱子总生物碱具有重要的意义。　　大孔吸附分离技术是目前应用较广的一种中药深加工技术,具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、

3、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点［2］，已被广泛应用于中草药有效成分的分离纯化。但马钱子总生物碱的大孔吸附树脂的富集,分离和纯化尚未见报道。本实验选择4种大孔吸附树脂分离马钱子总生物碱，以士的宁和马钱子碱为定量指标，筛选出最佳的树脂、洗脱溶剂及用量，以达到开发相应制剂的要求。　　1仪器与试药　　poa公司）为色谱纯;水为娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；其它试剂均为分析纯。士的宁、马钱子碱对照品（中国药品生物制品检定所）；大孔吸附树脂AB

4、-8、D101（南开大学化工厂）；LSA-10（西安蓝晓科技有限公司)；HPD-500(河北沧州宝恩化工有限公司)。　　2方法与结果　　2.1总生物碱含量的测定　　2.1.1色谱条件色谱柱为DiamonsilC18(250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇水乙酸三乙胺（76∶230∶2.4∶0.3）；流速1.0ml/min；检测波长254nm；柱温30℃。　　2.1.2标准曲线的绘制精密称取士的宁对照品6mg，马钱子碱对照品5mg定容置同一25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。分别精密移取1.0，2

5、.0，3.0，4.0，5.0ml至10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀。精密吸取10μl,注入液相色谱仪。以峰面积(A)为纵坐标,对照品浓度(C)为横坐标作图,得标准曲线。回归方程为:　　士的宁A=-87369+22961C，r=0.9998　　马钱子碱A=-69869+12255C，r=0.9997　　结果表明,士的宁浓度在24～120μg/ml,马钱子碱浓度在20～100μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系。　　2.2样品溶液制备马钱子药材用6倍量pH=5,50%的乙醇溶液提取3次,回流提取2h/次,合并

6、3次滤液，抽滤。减压浓缩回收至无醇味,加水稀释到适当浓度备用。　　2.3大孔吸附树脂静态吸附和解吸试验考察　　2.3.1树脂预处理大孔树脂分别用95%乙醇浸泡24h,充分溶胀,用乙醇洗至溶液加适量蒸馏水无白色浑浊现象时为止,最后用蒸馏水洗至无醇味,备用。　　2.3.2静态吸附容量测定精密量取预处理好的4种大孔吸附树脂1g（湿重）加入马钱子样品液30ml中,密封置于振荡器(25℃,100次/min)中振荡，充分吸附,12h后从上清液中取样,检测溶液中总生物碱含量的变化,计算饱和吸附量。结果见表1。　　2.3.3

7、静态解吸试验分别将上述充分吸附了马钱子总生物碱的4种树脂进行过滤,除去水液,再将其置于具塞锥形瓶中,加入95%乙醇溶液30ml密封,置恒温振荡器中进行解吸,12h后从上清液中取样,检测总生物碱含量变化,计算解吸率。结果见表1。　　饱和吸附量（mg/g）=［(初始浓度-吸附后浓度)×吸附液体积］/树脂重量（湿重）　　解吸率(%)=［洗脱液浓度×洗脱液体积］/饱和吸附量×100%　　由表1中数据可见,树脂AB-8对马钱子中总生物碱的吸附、解吸附性能最优,所以选择AB-8型树脂对马钱子进行纯化。表14种大孔树脂的静

8、态饱和吸附量及解吸率（略）　　2.4静态吸附动力学特征取AB-8树脂1g加入100ml(0.05g生药/ml)马钱子样品溶液中，室温条件下静置12h,使其达到饱和吸附,静置期间，每隔一定时间吸取上层液测定士的宁、马钱子碱的含量。以吸附时间（h）为横坐标，吸附量（mg/g）为纵坐标，绘制吸附动力学曲线，见图1。可见，各成分在起始阶段吸附速率较大，2h后士的宁、马钱子碱含量增加缓慢。　　2.5AB-8树