白花丹醌对人急性早幼粒细胞白血病细胞的体外效应

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1、白花丹醌对人急性早幼粒细胞白血病细胞的体外效应【摘要】根据作者已往的临床经验，中草药白花丹对急性早幼粒细胞白血病（APL）治疗有效，但至今尚无关于白花丹对APL疗效方面的系统研究。本研究的目的是通过NB4细胞体外观察白花丹提取物白花丹醌（plumbagin）对细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT比色法检测白花丹醌对NB4细胞增殖抑制作用；用光学显微镜及透射电镜观察细胞形态改变；DNA凝胶电泳及annexinV/PI双染实验测定检测细胞凋亡；DNAPI染色法检测细胞亚二倍体峰及细胞周期。结果显示:白花丹醌在2-15μmol/L

2、浓度范围内能够显著抑制NB4细胞的增殖，且呈剂量依赖性效应关系（P<0.01）；在光学显微镜及透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态变化；白花丹醌诱导细胞出现DNA梯形条带，annexinV＋/PI-凋亡细胞及亚二倍体峰，细胞周期阻滞于G2/M期，凋亡细胞比例与白花丹醌呈剂量依赖性效应关系(P<0.05)。结论：本研究首次证实白花丹醌能够抑制APL细胞系NB4的增殖、诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期进程。【关键词】白花丹醌　　EffectsofPlumbaginontheHumanAcutePromyelocyticLe

3、ukemiaCellsInVitro　　AbstractAccordingtopreviousclinicalexperiencesoftheauthors，plumbagozeylanicayelocyticleukemia(APL).Hoentallyorunequivocallyclinically.Thisstudyedtoinvestigatetheeffectsofplumbaginontheproliferation，cellcycleandapoptosisofAPLcelllineNB4Cells.Ce

4、llinhibitoryratesetricassay；morphologicchangesicroscopeandtransmissionelectronmicroscope;apoptosis-inducingeffectsinedbyDNAgelelectrophoresis，annexinV/PIdouble-stainedandPIsingle-stainedfloetry.Theresultsdemonstratedthat2-15μmol/Lplumbagininhibitedtheproliferatio

5、nofNB4cellsinadose-dependentmanner.Themorphologicchangesofcellapoptosis，suchaschromsomecondensationandapoptoticbodyformation，icroscopeandtransmissionelectronmicroscope.CellcycleanalysisshobagininducedannexinV＋/PI-cellincreaseandDNAfragmentation.Therebaginindose-d

6、ependentmanner(P<0.05).Itisconcludedthatforthefirsttimethepresentstudyshobagincaninhibitcellproliferation，blockcellcycleandinduceapoptosisofAPLcelllineNB4cells.　　Keybagin;acutepromyelocyticleukemia;NB4cell;apoptosis白花丹是一种生长在我国四川、福建、台湾、广西、广东等地区的常见植物，容易采获。白花丹具有祛

7、风散瘀、解毒杀虫、消肿止痛等作用，用于血瘀经闭、跌打损伤、痈肿疮毒等。白花丹醌（plumbagin）是白花丹的主要活性成分，具有广泛的药理活性，包括抗菌消炎、抗生殖、抗凝等作用［1-3］。研究表明，白花丹醌能够抑制P388淋巴细胞白血病、宫颈癌、肝癌等多种肿瘤细胞，是一种很有潜力的抗肿瘤药物［3-6］。根据作者已往的临床经验，中草药白花丹对人急性早幼粒细胞白血病（APL）治疗有效。但迄今为止尚无关于白花丹提取物白花丹醌对APL疗效的研究报道。本研究旨在以NB4细胞为体外模型，初步探讨白花丹提取物白花丹醌对APL细胞的增殖

8、、细胞周期及凋亡的影响。　　材料和方法　　主要药物及试剂　　白花丹醌（plumbagin，Lot：023K0760）为美国Sigma公司产品，溶解于二甲亚砜(DMSO)中，配成0.1mol/L储备溶液，置于-4℃保存，使用时应用RPMI1640培养液稀释至工作浓度（工作液中DMSO终浓度均小于0.1％，预实验证实对N