大鼠肾移植急性排斥模型中移植肾水通道蛋白2 mrna表达的变化论文

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1、大鼠肾移植急性排斥模型中移植肾水通道蛋白2mRNA表达的变化论文臧崇森张纪周傅耀文张文岚王金国王伟刚【摘要】目的研究水通道蛋白2（AQP2）mRNA在大鼠肾移植急性排斥模型中移植肾表达的变化及意义。方法正常大鼠肾脏为正常对照组；ethodsNormalV)Ver.3.0购于大连宝生物有限公司，PCR特异引物由上海生工合成：AQP2上游引物：5′TGTGGGAACTCAGATCCATAG3′，下游引物：5′AGGCTCTGAGGAGAGTGGA3′，扩增产物长度为791bp；做为内参的βactin上游引物：5′AAGAGAGGCATCC

2、TGACCCT3′，下游引物：5′TACATGGCTGGGGTGTTGAA3′,扩增产物长度为218bp。1.2方法1.2.1手术及动物分组利用显微外科技术动脉端端吻合、静脉Cuff套管吻合、输尿管端端吻合建立大鼠肾移植模型。正常雄性V)Ver.3.0试剂盒说明书进行操作，扩增条件为：94℃变性2min,然后94℃30s,60℃30s,72℃60s,共30个循环，最后72℃延伸10min。PCR结束后取20μl产物在1%琼脂糖凝胶上进行恒压电泳，80V,20min；然后0.5%溴化乙锭染色20min。用Kodak凝胶电泳成像分析系统（EDAS）

3、进行电泳结果的拍照及条带的强度分析，以βactin作为内源性RNA参照，分别计算每一条泳道的AQP2与βactin强度比值。1.3统计学方法数据用SPSS10.0统计软件包进行单因素方差分析，实验组间差异比较采用t检验。2结果对照组、同系基因对照组、同种异体移植急性排斥组、同种异体移植免疫抑制组大鼠肾脏AQP2mRNA的相对表达量分别为1.281±0.046、1.402±0.077、0.810±0.022、1.301±0.059。与对照组相比较，同种异体移植急性排斥组移植肾AQP2mRNA表达显著下调（P＜0.05）；与同系基因对照组和同种异体移

4、植免疫抑制组相比较，其移植肾AQP2mRNA表达显著下降（P＜0.05）。同系基因对照组和同种异体移植免疫抑制组中移植肾AQP2mRNA表达的变化与对照组相比较无统计学差异（P＞0.05），见图1。图1AQP2RTPCR扩增产物1.0%琼脂糖凝胶电泳结果3讨论肾移植术后AR时会出现不同程度的水钠潴留，与体内水钠平衡紊乱有关。目前认为水穿越细胞膜有两种方式：一是弥散通过脂质双分子层；二是通过细胞膜上的AQP，其介导作用在水分子的跨膜转运中占主导作用。肾脏集合系统是尿液浓缩的关键部位，AQP2是集合管上皮细胞上最重要且受血管加压素（AVP）调节的AQP

5、，参与介导抗利尿激素（ADH）依赖的肾集合管通透性〔4〕。因此，AR时移植肾AQP2的表达会发生相应的改变〔5〕。本研究发现AR时AQP2mRNA的表达下调。为了排除此种下调可能与缺血再灌注损伤及去神经损伤有关，本研究用近交系大鼠（HC完全相配。因此，近交系大鼠间肾移植不会发生AR。本研究中同系基因对照组仅有2只大鼠出现轻微的排斥，这与大鼠在繁育过程中有可能出现遗传的变异或污染有关。同系基因对照组移植肾AQP2mRNA表达的变化与正常对照组相比较无统计学差异，说明AQP2mRNA表达下调与缺血再灌注损伤及去神经损伤及其他的手术因素无关。为了进一步证

6、实这种下调与AR的关系，本研究建立了同种异体移植免疫抑制组。在此组中发现由于免疫抑制剂CsA的应用，组织形态学上可见的AR消失了，同时AQP2的下调也大大减轻或者完全消失，因此，本研究认为AQP2这种下调与肾移植术后AR有关。Velic等〔5〕认为集合管ADH依赖的调节水重吸收的主要靶点是AQP2，它也属于醛固酮调节载体的家族。肾移植术后AR时AQP2mRNA表达下调，而且CsA治疗及同系基因移植后没有该变化。本研究与上述结果相同，同种异体移植急性排斥组移植肾AQP2mRNA表达下调，与正常对照组相比较有统计学差异；而同系基因对照组和同种异体移植免疫

7、抑制组中移植肾AQP2mRNA表达的变化与正常对照组无统计学差异。AQP2在尿液浓缩中起到重要的作用，AR时AQP2表达下调，说明AR时集合系统的浓缩功能下降。但是，这会引起尿液重吸收的减少，对减轻AR时的水潴留有作用。Velic等〔6〕认为在AQP2表达下调的同时集合管上皮细胞钠离子通道的表达也下调，这可能是节约能量的一种保护办法，以帮助应激的器官恢复和保护移植肾免受在集合系统可见的非免疫性和免疫性损伤，有利于移植肾功能的恢复。【