递归渐进光谱投影比较中药材铁线莲色谱指纹特征论文

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1、递归渐进光谱投影比较中药材铁线莲色谱指纹特征论文.freell/min，柱温20℃，光谱记录范围为200～400nm。经比较，东北铁线莲和棉团铁线莲的色谱指纹特征中，至少分别有8和6种单独的化学成分存在.freelatismanshuricaRupr）和棉团铁线莲（Clematishex-apetalaPall）的干燥根及根茎被收载在中国药典一部中的威灵仙药材项下［4］，近年来发现具有多种药理作用［5］。中药威灵仙的指纹图谱研究，现仅涉及其挥发油部分［6］，揭示威灵仙内在化学成分本质的差异，对相关的药学深入研究与临床使用有重要的意

2、义。递归渐进光谱投影是新近提出的一种化学计量学多元分辨方法，可用于二维色谱数据重叠峰浓度窗口的确认［7］。本研究将递归渐进光谱投影法用于不同色谱指纹特征的化学成分的异同的分析，比较东北铁线莲和棉团铁线莲石油醚提取物的指纹图谱HPLC-DAD二维数据，发现东北铁线莲和棉团铁线莲石油醚提取部分中共有的化学成分有14种，两者单独的化学成分分别有8种和6种，东北铁线莲中较棉团铁线莲含有较多的齐墩果酸。实验结果为进步确定两种药材石油醚提取物中的化学成分及相关的药学研究奠定基础。1方法原理设A和B分别为经色谱-光谱联用采集的两种中药样品的色谱

3、指纹图谱的数据矩阵，矩阵的大小均为M×N阶，它们行的方向表征了色谱的流出信息（M个流出时间点），列的方向表征了光谱信息（N个吸收波长）。选择A中某一指纹特征峰的测定数据矩阵片断X，用渐近因子分析方法分别前向计算和反向计算获得其秩图［8］，根据秩图给出的组分数m，在A中设定m个前向和反向信息区。从第一信息区，选取一列数据作为代表性光谱s1，按设定的窗口尺寸个投影残差矢量对n个保留时间作图，判定两样品中化学成分的异同。当在某一保留时间i处，样品B中含有样品A中的化学成分，rji的数值必将接近于零，反之，在该保留时间点样品B中缺少样品A

4、中的化学成分。同理，以样品B为基准进行因子分析，选取代表性光谱，对样品A计算投影残差，可判定A中有无B中的化学成分。2实验部分2.1仪器与试剂高效液相色谱仪:HP1100型，包括Agilent1100四元泵，HP1100二极管阵列检测器，HP色谱化学工作站（美国安捷伦科技公司）。东北铁线莲、棉团铁线莲:2005年9月采自伊春市亮子河林区，按中国药典2005版一部相关项下鉴别为药典规定的相应品种。齐墩果酸对照品（110709-200304）购自中国药品生物制品检定所。乙腈、甲醇为色谱纯;无水乙醇、盐酸与石油醚（60～90℃）为分析纯

5、。2.2样品制备2.2.1对照品溶液取齐墩果酸对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇适量使其溶解，加甲醇至刻度。制成1mg/ml的齐墩果酸对照品溶液。2.2.2供试品溶液东北铁线莲及棉团铁线莲的干燥根和根茎，经粉碎后，分别过5号（180±7.6μm）药筛。分别取药材粉末1g，加乙醇50ml，加热回流2h，滤过，滤液浓缩至约20ml，加盐酸3ml，加热回流1h，加水10ml，放冷，加石油醚振摇提取3次，石油醚用量分别为20ml、10ml、10ml，蒸干石油醚，残渣用1ml甲醇溶解，经0.45μm油性微孔滤膜过滤，制成

6、东北铁线莲及棉团铁线莲的供试品溶液。2.2.3空白溶液取乙醇50ml，同供试品溶液制备方法，加热回流提取，石油醚残渣加甲醇1ml溶解制得。2.3指纹图谱获取2.3.1色谱条件色谱柱:EclipseXDB-C18柱（250mm×4.0mmID，5μm），保护柱:ZorbaxSB-C18柱（12.5mm×4.6mmID，5μm）;流动相:乙腈（A）-1‰磷酸水溶液（B）作梯度洗脱，0min，25%A-75%B，保持5min;30min，85%A-15%B，保持10min;45min，100%A，保持15min。流速:1.0ml/min

7、;柱温:20℃;检测波长与参比波长分别为210nm与400nm，相应谱带宽分别为4nm与50nm;进样量为20μl。2.3.2指纹图谱取齐墩果酸对照品溶液、空白溶液、东北铁线莲及棉团铁线莲供试液，分别按2.3.1项下的色谱条件进行检测。根据齐墩果酸对照品色谱与空白溶液的色谱确定齐墩果酸与空白峰，见图1a和图1b。选取两种铁线莲色谱中的齐墩果酸色谱峰为参照物峰，结合空白色谱峰，按国家药品监督管理局的中药注射剂色谱指纹图谱研究技术要求（暂行）规定的检测方法与相关内容制备指纹图谱，结果分别见图2a和2b。2.4数据分析在色谱仪上间隔2n

8、m记录采集东北铁线莲与棉团铁线莲色谱光谱二维数据，并选取各色谱中与参照物峰峰面积比大于2%的色谱峰作为比较分析的目标峰。以棉团铁线莲作为被比较的样品，按方法原理，从东北铁线莲的色谱光谱数据中的相应信息区内分别选取光谱，计算棉团铁线莲的数据投影残差并