sbhl对hela细胞生长抑制作用的影响论文

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1、SBHL对HeLa细胞生长抑制作用的影响论文【关键词】端粒酶【Abstract】AIM:ToobservetheinhibitingeffectsofSBHLonthegroechanisms.METHODS:TheproliferationofHeLacellsetry.TheexpressionsofhTRTgenemunohistochemistrytechniquesandthedifferentiationofHeLacellssastaining.RESULTS:Theproliferat

2、ionofHeLacellsg/LSBHL.TheinhibitingeffectincreasedgraduallyfolloentbySBHL,theexpressionsofhTRTgeneofHeLacellsdecreasedobviously.DifferentiatedHeLacellsentbySBHL.CONCLUSION:①Thegroeraseactivityisinhibitedandthegroerase;floetry;cellcycle;celldifferentiati

3、on【摘要】目的：观察SBHL对HeLa细胞生长的抑制作用，并探讨其作用机制.方法：用MTT比色法观察不同浓度SBHL对HeLa细胞增殖的影响；用流式细胞术对细胞周期进行分析；用免疫组化方法观察SBHL对HeLa细胞人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTRT)基因表达的影响.用瑞氏姬姆萨染色法观察SBHL对HeLa细胞形态的影响.结果：0.1~20.0mg/LSBHL对HeLa细胞增殖有明显的抑制作用，这种抑制作用随SBHL浓度的增加而增加；流式

4、细胞术对细胞周期进行分析的结果显示，随着SBHL浓度的增加，S期细胞含量逐渐降低，G1期细胞含量逐渐增加，SBHL将细胞阻滞于G1期，抑制DNA合成.SBHL处理的HeLa细胞与对照组相比.freelg/L.RPMI1640,胰蛋白酶和胎牛血清为Gibco公司产品；MTT,PI和DMSO均为Sigma公司产品.DAB显色试剂盒和通用型SP试剂盒和人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTRT)检测试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司.1.2方法用胰酶

5、消化处于对数生长期细胞，接种于96孔培养板中，以不同浓度梯度SBHL作用于HeLa细胞，每个浓度3个孔，同时设不加SBHL对照孔，培养液空白孔，对照孔各3孔.培养5d，每日取1板，加入MTT(1g/L)，继续培养4h后，移去上清并用吸水纸吸干培养液，再加入DMSO，振荡至结晶完全溶解后，用酶标仪测定A490nm.将处于对数生长期的HeLa细胞加入25mL培养瓶中，当80%～90%细胞汇合时，加SBHL作用72h，用胰酶消化收集细胞，PBS洗2次，4℃固定24h后，加入RNase，37℃水浴消化1h，再

6、加入PI，避光4℃染色30min200目网筛滤过，上流式细胞仪检测HeLa细胞周期变化.将1.0mg/LSBHL加入对数生长期细胞培养72h,消化成单个细胞，将其涂在玻片上，加丙酮固定.按试剂盒说明进行操作.用SP免疫组化法分别检测HeLa细胞hTRT基因的表达，图片置于摄像显微镜下，选取观察部位.随机选取3~5个视野，在图像分析仪下测定灰度值，灰度值用Y=0.299R+0.587G+0.114B计算.收集对数生长期细胞，用胰酶消化，制成细胞悬液，加SBHL终浓度为1mg/L，培养72h后取出盖片，乙

7、醇固定.加瑞氏姬姆萨染色，在显微镜下观察细胞形态.统计学处理：采用SPSS10.0软件处理，两样本均数的t检验.2结果2.1MTT比色法0.01mg/LSBHL对HeLa细胞生长抑制作用与对照组相似(P0.05)，0.1～20.0mg/LSBHL处理的HeLa细胞组与对照组相比均有显著性差异（P0.05）,说明0.1～20.0mg/LSBHL对HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用，而且随着SBHL浓度的增加，抑制作用增强(Tab1,.freelg/LSBHL处理的HeLa细胞72h后，细胞核被染成棕黄色

8、的HeLa细胞明显减少，大部分细胞核染成蓝色，呈阴性(Fig2B)，表明hTRT基因表达受到明显抑制.2.4HeLa细胞形态经瑞氏姬姆萨染色，光镜观察可见未经SBHL处理的HeLa细胞排列密集，细胞呈圆形，大小不一，瘤巨细胞多见；细胞核质比例大，核大、核仁多;而SBHL处理组细胞随药物浓度增大细胞排列稀疏，呈长梭形或多边形，胞质伸出长的不规则突起，相互联接成网状结构，细胞大小趋向一致，瘤巨细胞少见；细胞核、质比例增大，核小，且核仁减少，染色变浅(Fig3