丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞mmp

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1、丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP张亚飞，聂青和，邵彬，罗新栋，王平忠，陈朝霞，徐辉，李军【关键词】肝炎病毒【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofHCVpersistentinfectiononsynthesisandsecretionofMMP2andMMP9ofhumanplacentalsyncytiotrophoblastinvitro.METHODS:ELISAployedtoevaluatetheeffectofHCVpersiste

2、ntinfectiononsecretionofMMP2andMMP9ofhumanplacentalsyncytiotrophoblastinvitro,andfurthermore,gelatinzymographyRNAanplacentalsyncytiotrophoblastininfectiongroupdecreasedsignificantly（MMP2：t=4.186，P＜0.05；MMP9：t=2.325,P0.05）;ThesynthesisofproMMP2andproMMP9mR

3、NAofsyncytiotrophoblastofinfectiongroupdecreasedinparisonanplacentalsyncytiotrophoblastinvitro,RNA表达的影响.结果：感染组细胞分泌MMP2和MMP9能力明显下降（MMP2：t=4.186，P0.05；MMP9：t=2.325，P＜0.05）；RT－PCR结果显示感染组细胞proMMP2和proMMP9mRNA表达弱于对照组，但差异不明显（proMMP2：t=1.196，P＞0.05；proMMP9：t=1.4

4、17，P>0.05）.结论：丙型肝炎病毒持续感染时体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP2和MMP9合成分泌能力下降，为非特异性.【关键词】丙型肝炎病毒；合体滋养层细胞；金属蛋白酶2，9；体外0引言合体滋养层细胞的侵袭能力是其侵入母体子宫蜕膜及子宫螺旋动脉，参与形成胎盘（胎盘屏障）的生物学基础〔1〕.我们前期研究证实体外培养人胎盘合体滋养层细胞可感染丙型肝炎病毒（HCV）且其侵袭能力可因持续感染而下降〔2-3〕.研究表明，合体滋养层细胞的侵袭能力与金属蛋白酶2（matrixmetalloproteina

5、se2,MMP2）和金属蛋白酶9（MMP9）密切相关.合体滋养层细胞合成分泌MMP2和MMP9，降解细胞外基质（ECM），穿越ECM间隙，从而完成侵袭过程〔4〕.我们通过ELISA、明胶酶谱分析以及RTPCR等方法研究HCV持续感染对合体滋养层细胞MMP2和MMP9合成分泌的影响，探讨HCV感染抑制合体滋养层细胞侵袭能力的具体分子机制.1材料和方法1.1材料Percoll细胞分离液为美国Pharmacia公司产品；免疫组织化学染色用ABC试剂盒购自华美生物工程公司,所用细胞角蛋白及波形蛋白抗体购自宝泰克生

6、物工程公司；Matrigel人工重建基底膜材料购自BD公司；Trans）为Millipore公司产品；MMP2（Ab2）和MMP9（Ab1）鼠抗人PAb为LabVision产品；RNA提取试剂盒和RNAPCR试剂盒均为Promega公司产品.实验所用感染血清来自第四军医大学唐都医院传染病科丙型肝炎住院患者,肝功能检验正常，血清抗HCV检测阳性,其他肝炎病毒标志物（HBVM，抗HAV，抗HEV，抗CMV，抗EBV）均阴性，抗HIV阴性.扩增敏感试验定量检测HCVRNA6.4×107拷贝/L，基因分型HCV1

7、b型.正常血清来自门诊体检人员，经检测HBsAg，抗HCV阴性，肝功能检验正常.血清无菌采集，分装后-20℃冻存，用前经56℃，30min灭活补体.1.2方法1.2.1人胎盘滋养层细胞的分离、纯化、培养及鉴定〔2-3〕应用我们改良的分离、纯化方法取得人胎盘滋养层细胞，胎盘绒毛组织取自第10周手术流产胎儿.用ABC法进行的细胞角蛋白、波形蛋白染色对培养细胞进行鉴定.1.2.2HCV体外感染实验将纯化后的细胞分别培养于培养瓶和12孔培养板中，培养基为正常含200mL/L胎牛血清的高糖型DMEM培养液.37℃，

8、50mL／LCO2孵箱内培养24h后，进行第1次换液.感染组换以含200mL/L丙型肝炎患者血清和50mL/L胎牛血清的DMEM培养液为培养基；培养于含200mL/L正常人血清和50mL/L胎牛血清的DMEM培养液的滋养层细胞为正常对照.此后每24h更换同样培养基一次，共5次.第6次换液时，培养于培养瓶中的细胞更换同样培养基，培养24h后胰酶消化细胞；培养于12孔培养板中的细胞换无血清DMEM培养液，培养24h后取上清为检测标