无菌概念及洁净区操作规程培训

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1、培训（一）“无菌”概念及洁净区操作培训微生物及无菌知识我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。在一般空气中，微生物达800~3500个/m3，在土壤中达1~500×108个/g，（饮用水要求细菌总数≤100个/ml，大肠杆菌≤3个/ml。）人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有4~40万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达10~1000亿个。人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。（？）穿无菌服时，静止时的发菌量为10~300个/min，一般活动

2、时发菌量为150~1000个/min，行走时发菌量为900~2500个/min。咳嗽一次发菌量为70~700个/min，喷嚏一次为4000~60000个/min。所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。微生物是广泛存在于自然界的一群体形微小（直径小于1mm）、结构简单、肉眼看不见，必须藉助光学或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的生物。微生物具有以下特点：①体积小，面积大；②吸收多，转化快（2000倍体重/h）；③生长旺，繁殖快（20min分裂一次）；④易变异，适应强；⑤分布广，种类多（10万种以上）。消毒与灭菌消毒与

3、灭菌是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义，严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害人身安全。1．概念灭菌——使达到无菌状态的方法（GMP指南）。用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌（GB）。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖体和芽孢）。消毒——用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化（GB）。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。1．概念无菌——不存在活的生物（GMP指南）。

4、“无菌”从定义上来说是一个绝对的概念，但遗憾的是，在科学和技术高度发展的今天，药品的绝对无菌即做不到，也无法加以证实。FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品“无菌”的相对标准，它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为10-6（即产品的无菌保证值为6），系同一标准的不同表示法。这一标准于1980起收录于USPXX中，如今已为世界各国普遍接受和采用。2．常用消毒剂分类及作用范围酒精类（70%~75%乙醇水溶液）：以酒精为基质的化合物蒸发后没有任何残留，酒精类化合物仅能用作卫生洗涤剂或清洁剂。他们无法杀灭细菌芽孢。

5、在潮湿环境中浓度高于40%的酒精溶液（体积）比具有清洁卫生的效果；对于干燥表面消毒时，酒精的杀菌效果在体积比为60~70%时为最强。酚类（5%甲酚）：抑菌谱很广，对人体的毒性很低并且对多数材料的腐蚀性相对较小，对有机物具有较好的耐受性，会产生残留物，但能被生物降解，局限性在于对芽孢的杀伤力不强。季铵盐类化合物（苯扎溴铵0.1%水溶液）：属于表面活性剂，能够提供良好的除味和清洁能力，是许多阳离子型去污染的主要成分。只有阳离子和兼性去污剂才具有杀菌效力。其局限性在于抑菌谱很窄，不能杀孢子，而且醛类消毒剂（37%~40%甲醛液）：属高效

6、消毒剂，杀菌谱广，对细菌繁殖体、细菌芽胞以及真菌、病毒等均有杀灭作用，但作用时间多较其他高效消毒剂为长；温度升高甲醛的杀菌作用增强；（各消毒剂应轮换使用，以防止产生微生物耐药菌株；各种消毒剂应在规定使用期限内使用，注意防护措施。）3．常用灭菌法1）干热灭菌法　常见的有火焰、烧灼、干烤和红外线灭菌等。①火焰、烧灼：通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。②干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行灭菌。空气传热慢，穿透力不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使箱内温度不均，

7、部分物品灭菌不彻底。2）湿热灭菌法　通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。①煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是100℃，一般处理30~60min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。②低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用60~80℃加热（或煮沸）1h，然后置20~25℃保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。③高压蒸汽灭菌（热压灭菌法）：超过

8、一个大气压时，水的沸点高于100℃，反之亦然。高压蒸汽灭菌就是通过加压提高蒸汽温度，灭菌效果最好。它简便、经济、可靠、无毒，是最可靠、应用最广泛的灭菌法。此法适用于耐高温和潮湿的物品。常用条件为：115.5℃      30min121.5℃