水溶c100中还原型抗坏血酸的测定----26-二氯酚靛酚滴定法

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1、水溶C100中还原型抗坏血酸的测定----2,6-二氯酚靛酚滴定法回顾维生素定义；特点；分类维生素C；存在形式；理化性质；生理功能维生素C缺乏症；每日摄入量；来源维生素C的营养状况评价一、目的了解营养评价中实验室检查的意义掌握食物中还原型VitC测定方法掌握如何对食物中还原型VitC的含量进行分析及评价抗坏血酸含有-OH基，具有较强的还原性，能还原染料2,6-二氯酚靛酚。该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后为无色。在没有杂质干扰时，一定量的食物溶液还原标准染料的量与其中的抗坏血酸成正比。二、原理及步骤蓝色红色无色步骤用标准维生素C溶液标定2,6-二氯酚靛酚染料；用标定后的2,6-二氯酚靛

2、酚染料滴定样品，测得其还原型维生素C的浓度。操作步骤0.1%抗坏血酸标准储备液（1mg/ml），冰箱保存待用（已配制）。1%草酸溶液：1g草酸充分溶解后→洗入100ml量筒中，加蒸馏水至100ml刻度，搅匀→备用（已配制）。配制抗坏血酸标准应用液：用移液管取1ml0.1%抗坏血酸标准储备液于50ml容量瓶，加1%草酸至刻度，摇匀，留用。（1mg/50ml）空白试验：在三角烧瓶中加入10ml1%草酸，用2,6-二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果Cml。（两次）标定二氯酚靛酚染料：在三角烧瓶中加入5ml抗坏血酸应用液、5ml1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉

3、红色，保持15秒不褪色为终点。记录所用染料Aml。2,6-二氯酚靛酚染料的标定操作流程2,6-二氯酚靛酚染液A:标准维生素C溶液(5ml)+草酸（5ml，1%）滴定无色变为淡红色15s内不褪色C:空白组为草酸（10ml，1%）1ml染料相当于还原型维生素C的mgT(mg/ml)=0.1A-C（ml）水溶C100稀释液制备：市售水溶C100饮料冰箱待用。使用前用草酸溶液稀释10倍（已制备）。水溶C100稀释液中抗坏血酸浓度测定：在三角烧瓶中加入5ml水溶C100稀释液、5ml1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果Bml。（两次）样品中还原型维生素C

4、的浓度的测定(采用标定的2,6-二氯酚靛酚染料滴定)操作流程2,6-二氯酚靛酚染液B:稀释后的样品（5ml）+草酸（5ml，1%）滴定无色变为淡红色15s内不褪色样品中还原型维生素C浓度C样（mg/L）=（B－C）×T5ml×10×1000注意事项由于抗坏血酸在许多条件下都容易被氧化，因此，测定过程要迅速，并且应避免接触铜、铁等金属，一般不超过2min。样品中可能有其他杂质也能还原2,6-二氯酚靛酚，但还原速度比还原型维生素C慢，故滴定时以15s内粉红色不褪去为止；维生素C标准品溶液：短期、棕色瓶、冷藏；滴定终点的判断结果分析与讨论配制抗坏血酸应用液：用移液管取1ml0.1%抗坏血酸标

5、准母液于50ml容量瓶，加1%草酸至刻度，摇匀，留用。空白试验：在三角烧瓶中加入10ml1%草酸，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果C(ml)。（两次）标定二氯酚靛酚染料：在三角烧瓶中加入5ml抗坏血酸应用液、5ml1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录所用染料A(ml)。1ml二氯酚靛酚相当于抗坏血酸Tmg，T=0.1/（A－C）。(两次)水溶C100稀释液中抗坏血酸浓度测定：在三角烧瓶中加入5ml柠檬汁稀释液、5ml1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结果(Bml)。(两次)C样（

6、mg/L）=（B－C）×T5ml×10×1000THANKYOU还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚，自身氧化为脱氢型，在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚显示红色，还原后变为无色。维生素C全部被氧化时，滴下的染料立即使溶液变成粉红色，当溶液由无色变为微红色时表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。