hiv-1nef基因在thp-1细胞的表达和活性检测

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1、HIV-1Nef基因在THP-1细胞的表达和活性检测覃晓琳，刘朝奇，任东明，韩莉，杨凡(443002湖北宜昌，三峡大学分子生物学研究所)[摘要]　目的将HIV-1Nef基因转染THP-1细胞，获得稳定表达Nef蛋白的细胞克隆，为研究Nef对巨噬细胞生物学活性的影响奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3.1(+)-Nef和pcDNA3.1(+)（阴性对照）转染THP-1细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westernblot、细胞免疫荧光等方法检测目的蛋白在真核细胞内的表达及定位,采用共转染法将荧光报告基因转染pcDNA3

2、.1(+)-Nef和pcDNA3.1(+)的THP-1细胞，通过测定荧光（RLU）值来评价Nef蛋白的生物学活性。结果转染细胞经G418筛选后获得稳定表达Nef的THP-1细胞株，RT-PCR及Westernblot检测结果表明Nef在真核细胞中成功表达，细胞免疫荧光结果显示,THP-1-Nef细胞表达的Nef蛋白主要定位于细胞质中，荧光酶标仪检测转染了HIV-1LTR-Luc和NFκB-Luc荧光报告基因的THP-1-Nef和THP-1-3.1细胞的RLU值。结论成功建立了THP-1-Nef细胞稳定表达细胞株，HIV-1Nef在T

3、HP-1细胞中对于HIV病毒调控序列及细胞信号通路具有调节作用。问题1：摘要结果适当罗列正文结果中的重要数据。[关键词]HIV-1Nef；THP-1细胞；稳定表达；荧光报告基因[中图法分类号]R392.11　　　　[文献标志码]AEstablishmentofHIV-1NefstableexpressedcellstraininTHP-1cellsandtheactivitydetectionQINXiaolin,LIUChaoqi，RENDongming，HANLi，ANGFan（InstituteofMolecularBiolo

4、gy,ThreeGorgesUniversity,Yichang，443002,China）[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectsofHIV-1negativeregulatefactor(Nef)geneinTHP-1cells,establishmentofNefstableexpressedcells.MethodsPlasmidspcDNA3.1(+)-NefandpcDNA3.1(+)werestablytransfectedintoTHP-1cellsrespectively

5、.TheexpressionandlocationofNefproteinwereconfirmedbyRT-PCR,Westernblotandcellimmunofluorescence.FluorescentreportergenewastransfectedintoTHP-1NefandTHP-13.1cellsrespectivelybyCo-transfection,toevaluatethebiologicalactivityofNefprotein.ResultsWeobtainedthestableexpressi

6、onTHP-1NefcelllinethroughG418selection.RT-PCRandWesternblotshowedthattheNefsuccessfullyexpressedinTHP-1cells,cellimmunofluorescenceshowedthattheNefproteinwasmainlylocatedinthecytoplasmofTHP-1-Nefcells.RLUvaluesofTHP-1-NefandTHP-1-3.1cells,whichtransfectedHIV-1LTR-Lucan

7、dNFκB-Lucreportergene,weredetectedbyfluorescencemicroplatereader.ConclusionStableexpressedNefcellsTHP-1Nefwasestablishedandidentified.HIV-1NefplayanimportantroleintheregulatorysequencesofHIV-1VirusandsignalingpathwaysintheTHP-1cells.[Keywords]HIV-1Nef；THP-1cells；Stable

8、expression；Fluorescentreportergene问题2：请按2010年本刊格式补充基金英文写法及通信作者座机号码。并请核实基金名称。Supportedbythe.Correspondingauthor:LIUCha