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时间:2019-01-09
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1、钙磷氮三种元素对葛仙米球状体诱导和生长的影响 摘要:葛仙米是一种经济价值很高的水生蓝藻类,具有食、药用价值。为了能在试验室条件下尽快地诱导葛仙米球状体,并且使其长大,探索了氯化钙、磷酸氢二钾、硝酸钠这3种元素在培养配方中的最佳浓度分别为288g/L、80g/L、15g/L。试验结果表明:这几种元素在培养基中的合适浓度配比对球状体诱导和长大更有利。 关键词:葛仙米培养;球状藻体;配方调整;透气培养 葛仙米(NostoccommuneVanch)是一种经济价值很高的水生蓝藻类,属念珠藻属,学名拟球状念珠藻,
2、拉丁文为Nos-tocsphaemidesKutzing。具有食、药用价值,因生长在稻田或浅水池沼里,形似木耳的胶团,故称之水木耳或田木耳。葛仙米是一种淡水藻类,为湖北鹤峰县的著名特产,现在由于耕作方式、农药化肥的使用,使葛仙米的产量大大降低,在走马坪镇的个别地方甚至已经绝迹,由于野生资源锐减,因此,葛仙米的人工培养具有一定的开发价值和应用前景。试验室条件下葛仙米的生长速度除了受光照、温度、pH值等因素的影响外,还受其它因素的影响,其中培养基中钙、磷、氮这3种元素的量就是重要的影响因素。 1材料与方法 1
3、.1试验材料 葛仙米藻种由湖北武汉中国科学院水生生物研究所提供。 1.2试验仪器7 显微镜、超净工作台、灭菌锅、电子天平、光照培养架。 1.3试验方法 对藻种,采用固体培养基和液体培养基2种方法培养。液体培养是采用BGll0,其中除了微量元素和BGll0配方一致外,其它大量元素按照调整以后的BGll0配方进行培养。从固体培养基表面取得球状藻体,无菌操作下接种到液体培养基中,培养15天,更换液体培养基,如此培养3个循环。固体培养是从液体培养基中,在无菌操作的条件下,挑选颜色为浓绿色,直径平均?R3.5
4、mm的球状藻体,研磨成糊状,以同配方的液体培养基辅助过筛,得到的浆状研磨液用吸管吸取,每2.2~2.5mL接种于50mL每瓶的固体培养基中,在温度为25℃,光照为3000Lux(2根35W、220V白炽灯对应0.62m2的培养架面积)的条件下,培养15天即可在解剖镜下看到粒径约0.5mm的球状藻体。 试验中用的B配方为:(1)硫酸镁75g/L。(2)磷酸氢二钾40g/L。(3)EDTAlg/L。(4)氯化钙36g/L。(5)柠檬酸+柠檬酸铁铵6+6g/L。(6)碳酸钙36g/L。(7)微量元素:硼酸2.86
5、g/L。MncL2?4H2O1.81g/L。ZnSO4?7H2O0.22g/L。CuSO4?5H2O0.079g/L。钼酸钠0.39g/L。硝酸钴0.0494g/L。(8)硝酸钠10g/L。试验中的固体培养基配法:配制1L固体培养基,先加9g卡拉胶,加试验用蒸馏水溶解卡拉胶后对应的加B配方各1mL,用蒸馏水定容到1L,然后微波炉加热10-12min,用NaOH溶液调节pH值到7.3,装瓶加盖,121℃灭菌20min。7 试验中的液体培养基配法:配制5L液体培养基,先加4L试验用蒸馏水,然后加B配方各5mL,
6、再加960mL蒸馏水,用固体氢氧化钠调节pH值到7.3,装瓶(约15瓶)加盖,121℃灭菌20min。 1.3.1钙对葛仙米球状体诱导和长大的试验。研究发现,葛仙米钙与土壤中钙有明显的正相关关系,土壤中的钙很容易被葛仙米同化吸收。用B配方其中(4)为钙浓度,设计浓度梯度标记为BCa1、BCa2、BCa4、BCa8、BCa16。即(4)分别按照1、2、4、8、16mL/L其它不变,各配固体培养基10瓶(其中5瓶用塑料瓶盖封盖,5瓶用透气封口膜封盖)总共50瓶。其中B配方各个号添加次序为(4)、(1)、(5)、
7、(3)、(6)、(7)、(2)、(8)。在固体培养基上长出直径约3mm的球状体颗粒后,配制BCa1、BCa2、BCa4、BCa8、BCa16各5L装15瓶液体培养基,全部用封口膜封盖进行固转液培养。 1.3.2磷对葛仙米球状体诱导和长大的试验。在自然条件下周围磷浓度的波动会引起葛仙米球状体藻殖段的形成。念珠藻可以利用一些有机磷的化合物。用B配方其中(2)为磷浓度,设计浓度梯度标记为BCa1、BCa2、BCa4、BCa8、BCa16。各配固体培养基10瓶(其中5瓶用塑料瓶盖封盖,5瓶用透气封口膜封盖)总共50
8、瓶。其中B配方各个号添加次序为(4)、(1)、(5)、(3)、(6)、(7)、(2)、(8)。用B配方配制BCa1、BCa2、BCa4、Ca8各5L固转液培养继续观察磷浓度对长势的影响。 1.3.3硝态氮对葛仙米球状体诱导和长大的试验。葛仙米原植体形态建成过程在充气和有硝态氮存在的情况下,较快。硝态氮的存在尽管使异型胞减少,但不能完全阻止异型胞的分化。无氮充气条件下,最后形成的原植体多为球形,而在
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