内皮素-1小干扰rna抑制醛固酮诱导的心肌纤维化

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1、中文摘要评价siRNA在心脏成纤维细胞的转染效率和转染持续时间。用JEDA-801D形态学图像分析系统计算转染细胞中绿色荧光蛋白的积分光密度值。2ET-1siRNA抑制Ald诱导的心肌纤维化在舢d诱导的心肌纤维化细胞模型中应用ET-1siRNA转染心脏成纤维细胞，以探讨ET-1在Aid诱导的心肌纤维化中的作用。无菌条件下开胸剪取SD大鼠心室，用胰蛋白酶消化法和差速贴壁法获得心脏成纤维细胞。试验采用3—4代心脏成纤维细胞，随机分为以下5组：(1)空白对照组：细胞仅加入培养基opti．MEM@I。(2)Aid+controlsiRNA组：细胞加入Opti-MEM@I培养基，以及Lipofec

2、tamineTMRNAiMAX转染试剂和contr01siRNA的混合溶液，并加入Ald诱导细胞纤维化。(3)Ald+ET-1siRNA1组：细胞加入Opti．MEM@I培养基，以及LipofectamineTMRNAiMAX转染试剂和ET-1siRNA1的混合溶液，并加入Aid诱导细胞纤维化。(4)A1d+ET-1siRNA2组：细胞加入Opti．MEM@I培养基，以及LipofectamineTMRNAiMAX转染试剂和ET-1siRNA2的混合溶液，并加入Ald诱导细胞纤维化。(5)Ald+ET-1siRNA3组：细胞加入Opti—MEM@I培养基，以及LipofectamineT

3、MRNAiMAX转染试剂和ET-1siRNA3的混合溶液，并加入Ald诱导细胞纤维化。采用ELISA法检测心脏成纤维细胞和培养上清液中ET．1的变化(每组n=6)，MTT法检测心脏成纤维细胞的增殖(每组n_8)，羟脯氨酸含量测定法检测细胞培养上清液中胶原的含量(每组n=6)。结果：1．1同一时间点不同浓度siRNA的转染结果空白对照组和LipofectamineTMRNAiMAX转染试剂组，在各时间点的明场两组间心脏成纤维细胞的数量无明显差异，表明本实验中使用的LipofectamineTMRNAiMAX转染试剂的浓度对细胞毒性较低；在荧光观察时均未看到带绿色荧光的细胞，说明siRNA转

4、染具有特异性。不同浓度siRNA转染组在6h和12h均可在多数心脏成纤维细胞的胞质和胞核观察中文摘要到明显的绿色荧光，在24h荧光强度明显增强，并持续到48h，72h时荧光强度有所降低，但仍然较强。在6h和12h时，心脏成纤维细胞的转染效率和绿色荧光蛋白的积分光密度值随着siRNA转染浓度的增加呈浓度依赖性增加。在24h和48h时，各siRNA转染浓度组的转染效率和绿色荧光蛋白的积分光密度值均较高，100nmol／L组与其它各组有统计学差异(P

5、点siRNA的转染结果在siRNA浓度12．5nmol／L时，转染6h组细胞的转染效率较低。与6h组相比，12h、24h、48h和72h组的转染效率均显著增加(P

6、iRNA对心脏成纤维细胞ET一1表达的影响ELISA结果表明，与空白对照组相比，Aid+controlsiRNA组细胞中ET一1含量显著升高(P<0．01)。给予ET-1siRNA后Ald+ET-1siRNA1、Ald+ET-lsiRNA2和Ald+ET-1siRNA3组细胞中ET．1含量，与舢d+controlsiRNA组相比均显著降低(P<0．01，P<0．01，P<0．01)，并且明显低于空白对照组(P<0．01，P<0．01，P<0．01．)。Ald+ET-1siRNA2组比Ald+ET-1siRNA1组和Ald+ET-1siRNA3组细胞中ET．1含量降低更明显，但无统计学差异

7、。2．2Ald和ET-1siRNA对心脏成纤维细胞培养上清液中ET一1含量的影响ELISA结果表明，与空白对照组相比，Aid+controlsiRNA组细胞培养上清中ET．1的含量显著升高(尸<0．t)。给予ET-1siRNA后Ald+ET-1siRNA1、2和3组细胞培养上清中ET．1含量，与Aid+controlsiRNA组相比均显著降低(P<0．01，P<0．01，P<0．01)，并且明显低于空白对照组(P<0．01，P<0．