daxx介导oxldl诱导巨噬细胞凋亡和胆固醇蓄积的关系

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1、贺庆芝南华大学硕士学位论文中文摘要Daxx介导OX．LDL诱导巨噬细胞凋亡与胆固醇蓄积的关系研究生：贺庆芝导师：廖端芳教授专业：药理学目的：研究Daxx介导OX．LDL诱导巨噬细胞凋亡与胆固醇蓄积的关系。方法：用不同浓度的氧化型低密度脂蛋白(ox．U)L)处理RAW264．7细胞48h，MTI"法检测OX．LDL对RAW264．7细胞生长的影响；流式细胞术和DNA断裂片段分析法研究OX．LDL诱导的细胞凋亡；用特异性siRNA沉默Daxx在RAW264．7细胞中的表达，通过AO／EB染色观察基因沉默后的细胞凋亡形态学改变；高效液相色谱(HPLC)检测细胞内胆固醇含量；油红O染色观察

2、细胞内脂滴的形成情况；RealtimeRT-PCR检测细胞内DaxxmRNA、SCAPmRNA的表达情况；用WesternBlot印迹法检测caveolin．1蛋白的表达。结果：经不同浓度OX—LDL(Omg／L、12．5mg／1．,、25mg／L、50mg／L、75mg／L)处理RAW264．7细胞48h后，MTT结果显示：随着药物浓度的增加，细胞活性明显下降，依次为100％+_7．28％；103．2％±16．35％；76．27％+_16．54％；56．49％+_11．94％；40．65％±8．76％，OX．LDL在25mg／L时就对细胞活性产生明显的抑制作用，IC50=50．6

3、mg／L。流式细胞术结果显示：对照组细胞凋亡率为2．3％，用12．5mg／L、25mg／L、50mg／L、75mg／LOX—LDL处理RAW264．7细胞48h，凋亡率分别为4．9％、8．6％、14．7％、33．1％，凋亡率呈明显的浓度依赖性变化。此外，50mg／LOX—LDL处理细胞2贺庆芝南华大学硕士学位论文不同时间(Oh、12h、24h、48h、72h)，随着OX．LDL作用时间的延长，细胞凋亡率呈时间依赖性增加，50mg／LOX．LDL处理72h组凋亡率为27．9％。同时通过琼脂糖凝胶电泳分析DNA断片，50mg／LOX．LDL处理细胞48h组可观察到凋亡特征性DNA梯形条

4、带。RealtimeRT-PCR结果发现随着OX．LDL浓度的递增和作用时间的延长，DaxxmRNA的相对表达量呈浓度依赖性和时间依赖性增加。在50mg／LOX．LDL处理细胞48h时DaxxmRNA的相对表达量达到最高(Daxx／B—actinmRNA由1．25x10-4上升至5．3x10-4)。RAW264．7细胞经50mg／LOX．LDL处理48h后，AO／EB染色显示明显的细胞凋亡形态学特征，出现核固缩、碎裂，同时细胞内胆固醇含量显著增加(由76．3#g／mg蛋白上升至368．5／tg／mg蛋白)，油红。显示细胞内有大量的脂滴存在。用特异性siRNA沉默Daxx在RAW26

5、4．7细胞中的表达能引起凋亡抑制，AO／EB染色显示细胞凋亡率明显降低，同时细胞内胆固醇含量明显下降(由368．5／zg／mg蛋白下降至236．9／％g／mg蛋白)，油红O染色显示细胞内脂滴也明显减少；Western—blot显示caveolln．1表达呈时间依赖性上调，转染DaxxsiRNA后其表达有所下调；RealtimeRT-PCR结果表明OX．LDL抑制SCAPmRNA的表达，经RNA干扰后，SCAPmRNA的表达上调。结论：1、Daxx具有介导OX．LDLj秀导的RAW264．7巨噬细胞凋亡作用。2、Daxx可能通过下调SCAP的表达和上调caveolin．1的表达来影响

6、巨噬细胞源性荷脂细胞胆固醇的摄取，从而发挥促细胞凋亡作用。关键词：Daxx、氧化型低密度脂蛋白、巨噬细胞、凋亡、caveolin．1、si融峪3贺庆芝南华大学硕士学位论文CorrelationbetweenDaxxmediatedapoptosisofRAW264．7cellsandcellularlipidaccumulationinducedbyOX—LDL(ABSTRACr)OBJECT：ToexplorecorrelationbetweenDaxxmediatedapoptosisofRAW264．7macrophagesandcellularlipidaccumulati

7、oninducedbyoxidizedlowdensitylipoprotein(ox·LDL)．METHODS：RAW264．7macrophagesgrowthinhibitionwasmeasuredbyMTrassay．TheapoptosiseffectofRAW264．7murinemacrophagesinducedbyOX-LDLwasanalyzedbyflowcytometricanalysisandDNAagaroseelectrophoresi