二氢青蒿素对人宫颈癌hela和siha细胞辐射敏感性的影响与作用机制研究论文

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1、二氢青蓠素对人宫颈癌Hela和Siha细胞辐射敏感性的影响及作用机制研究中文摘要二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa和Siha细胞辐射敏感性的影响及作用机制研究中文摘要目的本课题研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)对p53突变型人宫颈癌HeLa细胞及p53野生型人宫颈癌Siha细胞辐射增敏作用及机制。通过检测二氢青蒿素的浓度和作用时间对HeLa和Siha细胞的抑制效应，确定用作辐射增敏实验的药物浓度及时间：通过研究二氢青蒿素对辐射后HeLa和Siha细胞增殖能力的影响，探讨二氢青蒿素对细胞辐射敏感性的影响；通过

2、对二氢青蒿素及X．射线作用后细胞周期以及细胞周期调控相关蛋白weel，cyclinBl，ode2表达水平的检测，对二氢青蒿素辐射增敏机制进行研究。并且，比较分析二氢青蒿素对具有不同p53功能的人宫颈癌细胞辐射增敏作用及作用机理的差异性。方法(1)利用四氮唑盐比色试验(MTT)检测二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa和Siha细胞存活分数的影响；(2)应用克隆形成法及细胞凋亡率检N--氢青蒿素对细胞辐射敏感性的影响；(3)利用流式细胞术检N--氢青蒿素及X．射线作用后对细胞周期的影响；(4)应用WesternBlot法观察二氢青蒿素及X．

3、射线作用后对细胞周期调控相关蛋白weel，eyclinBl，ode2的影响。结果(1)二氢青蒿素对人宫颈癌细胞的抑制率具有浓度及时间依赖性，其抑制作用随二氢青蒿素浓度和作用时间的增加而增加；(2)二氢青蒿素对p53功能不同的人宫颈癌细胞的抑制率不同，当人宫颈癌HeLa和Siha细胞的抑制率均达到16％左右时，二氢青蒿素作用浓度分别为209mol／L和1001amol／L(3)相同二氢青蒿素浓度下，细胞克隆形成率随照射剂量增加而减少；二氢青蒿素对p53突变型人宫颈癌HeLa细胞具有明显的辐射增敏作用，对p53野生型人宫颈癌Siha

4、细胞没有明显辐射增敏作用。对于HeLa细胞，单纯照射组和药物+照射组平均致死剂量(Do)分别为2．32Gy、1．SSGy，准阈剂量(Dq)分别为1．18Gy、0．59Gy，辐射增敏比(SER)为1．47；对于Siha细胞，单纯照射组和药物+照射组平均致死剂量(Do)分别为2．26Gy、2．14Gy，准阈剂量(D。)分别为1．1my、1．ooGy，辐射增敏比(SER)为1，06：(4)流式细胞术检测细胞凋亡结果显示，与单纯照射组的16．26％凋亡率相比，HeLa细胞二氢青蒿素对人宫颈癌Hcla和Siha细胞辐射敏感性的影响及作用机

5、制研究中文摘要药物+照射组的凋亡率升至26．87％，差异有统计学意义(PO．05)；(5)流式细胞术检测细胞周期发现，对于HeLa细胞，药物+照射组与单纯照射组相比，Go／Gl期细胞比例上升(P0．05)；(6)Western-blot分析，在HcLa细胞，药物+照

6、射组wecl蛋白较单纯照射组减少，cyclinBl蛋白较单纯照射组增加，cdc2蛋白变化不明显；在Siha细胞，药物+照射组weel蛋白、cyclinBl蛋白、ode2蛋白较单纯照射组均变化不明显。结‘论(1)二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa和Siha细胞的抑制率随着二氢青蒿素浓度的增加及作用时间的延长而增加；(2)相同浓度的二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa和Siha细胞的抑制率不同，对HcLa细胞的抑制率高于Siha细胞；(3)二氢青蒿素能明显增加p53突变型宫颈癌细胞HeLa的辐射敏感性，而对于p53野生型宫颈癌细胞Siha没有明显

7、的辐射增敏作用；(4)二氢青蒿素能增加受照后的人宫颈癌HeLa细胞的凋亡率；而对于人宫颈癌Siha细胞，二氢青蒿素联合照射组与单纯照射组相比凋亡率无明显变化；(5)二氢青蒿素对HeLa细胞的辐射增敏作用与其抑制辐射诱导活化的G2／M期阻滞效应，使受损细胞没有经过修复直接进入分裂期而发生死亡有关；二氢青蒿素对Siha细胞无辐射增敏作用与辐射主要诱导Siha细胞产生Gl／S期阻滞，而对G2／M期没有明显阻滞效应有关；(6)HeLa细胞经二氢青蒿素联合照射后，主要通过诱导weel蛋白表达降低，eyelinBl蛋白表达增高，从而减弱辐射

8、诱导的G2／M期阻滞效应，发挥辐射增敏作用；Siha细胞经辐射诱导主要发生Gl／S期阻滞，故二氢青蒿素联合照射后，与调控G2／M期有关的weel蛋白和cyclinBl蛋白表达均变化不明显。(7)HeLa和Siha细胞经二氢青蒿素联合照射后，edc2蛋白的表达均没