骨髓间充质干细胞移植对嘌呤霉素氨核苷肾病大鼠足细胞修复作用的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文缩略词BMSCsBrduBUNDMSoFBSFCMFn．CGAPDHI．EL-DMEMMCNSNnTNSODPANPBSRT．PCRSetSD缩略词表英文全称Bonemesenchymalsterncells5-bromodeoxyuridineBloodureanitrogenDimethylsulfoxideFetalbovineseflunFluorescencecytometryFluoresceinisothiocyanateGlyceraldehydephosphatedehydrogenaseInt

2、raperitonealLowglucoseDMEMMinimalchangenephriticsyndrome3-4·-5··dimethythiazolNephroticsyndromeOpticaldensityPuromycinaminonucleosidePhosphate-buffersalineReversetranscriptionPolymerasechainreactionSerumcreatiniDeSlitdiaphragms中文全称骨髓间充质干细胞5一溴脱氧尿嘧啶核苷尿素氮二甲基亚砜胎牛血清流式细胞术异硫氰酸

3、荧光素磷酸甘油醛脱氢酶腹腔内注射低糖培养基微小病变型肾病四甲基偶氮唑蓝肾病综合征光密度嘌呤霉素氨基核苷磷酸缓冲盐溶液逆转录聚合酶链反应血肌酐足突间裂孔隔膜徐州医学院硕士学位论文骨髓间充质干细胞移植对嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠足细胞修复作用的研究中文摘要目的探讨骨髓间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells，BMSCs)移植对嘌呤霉素氨基核苷(puromycinaminonueleoside，PAN)肾病大鼠足细胞足突的修复作用及其对裂孔隔膜分子Nephrin表达的影响，为BMSCs移植治疗肾病综合征(nephrofi

4、csyndrome,NS)提供实验依据。方法全骨髓贴壁筛选法体外分离、培养、扩增大鼠BMSCs，流式细胞仪鉴定BMSCs表面抗原，5．溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine，Brdu)对细胞进行标记；6周龄健康雄性SD大鼠45只随机分为3组，每组15只。模型组：一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷(puromyeinaminonucleoside，PAN)造模，按15mg／1009注射，于造模即日通过腹主动脉近肾动脉处注射lml生理盐水治疗；BMSCs组：PAN(15mg／1009)造模，于造模即日通过腹主动脉近肾动脉处注

5、射lmlBMSCs治疗(细胞移植前经Brdu标记示踪)，剂量为每只大鼠约l×106／ml；对照组：不予以造模。实验第10d杀鼠，留取24h尿检测尿蛋白水平；血标本检测血清白蛋白(Alb)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)等生化指标；电镜下观察肾组织足细胞足突改变；免疫组化法检测Brdu标记的细胞在肾组织中的表达；半定量RT-PCR及Western．blot法检测NephrinmRNA及蛋白的表达变化。结果①原代分离培养的BMSCs特异性好，流式细胞仪鉴定CD90表达阳性、CD45表达阴性。②实验第10d，模型组大鼠

6、出现大量蛋白尿、血白蛋白降低、胆固醇升高。与模型组比较，BMSCs组尿蛋白、血胆固醇降低，血白蛋白回升，差异有统计学意义(尸<现05)。各组问血尿素氮、肌酐值无明显变化，差异无统计徐州医学院硕士学位论文学意义(侈现刀易。③电镜下，对照组足细胞足突结构清晰、无融合现象，模型组足细胞足突广泛融合、变平，而BMSCs组足突部分融合。④免疫组化结果显示经Brdu标记的BMSCs在肾小球及肾小管聚集。⑤半定量RT-PCR结果表明，模型组NephrinmRNA相对表达量较对照组明显下降，BMSCs组与模型组比较有所增加，差异有统计学意义(尸

7、5)。(查)Wester-blot结果表明，模型组Nephrin蛋白的相对表达量较对照组明显下降，BMSCs组与模型组比较有所增加，差异有统计学意义(尸<现05)。结论BMSCs移植能增加PAN肾病大鼠足细胞足突Nephrin的表达：BMSCs移植对PAN肾病大鼠足突融合有一定的改善，Ncphrin表达的增加可能在其中发挥了一定的作用。关键词骨髓间充质干细胞；移植；嘌呤霉素氨基核苷；肾病综合征；Nephrin徐州医学院硕士学位论文EffectofBoneMesenchymalStemCellsTransplantationonPuro

8、mycinAminonucleosideNephropathyRatsPuromycinAm

9、nonucle0Sioeer013amyAbstractObjectiveToinvestigatewhethertransp