mirnas在雷公藤甲素抗肝癌效应中作用及机制研究

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1、第二军医大学博士学位论文miRNAs在雷公藤甲素抗肝癌效应中的作用及机制研究TheRolesofmiRNAsintheAnti．tumorEffectsofTriptolideinHepatocellularCarcinomaCells专业：中西医结合临床研究生：李曙光导师：凌昌全教授培养单位：长海医院申请学位：临床医学博士论文提交日期：2013年3月论文答辩日期：2013年5月二O一三年三月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与

2、我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：季-蒲杰签字日期：2013年5月15日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：孛曰暑先导师签名：(签字日期：2013年5月15日签字日

3、期：2013年5月15目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一6英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，10第一部分雷公藤甲素体内外抗肝癌效应的实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17第二部分雷公藤甲素对肝癌细胞内miRNAs表达的调节作用及机制研究··39第三部分miRNA表达与肝癌临床病理特征的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·70全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·78参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·80附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·86综述雷公藤甲素抗肿瘤作用靶分子研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·92致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·98miRNAs在雷公藤甲素抗肝癌效应中的作用及机制研究摘要一、研究背景及目的：原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，具有早期诊断难，病程进展快，病死率高等特点，被称为“癌中之王”。全球每年有超过600000人死于肝癌，死亡人数居所有肿瘤相关死亡第三位。研究表明，肝癌的发生与慢性病毒性肝炎、酒精性肝病及黄曲霉素摄入

5、有密切关系。我国有数目庞大的慢性乙型肝炎患者及乙肝病毒携带者，肝癌发病率居全球第一位，给我国带来了沉重的疾病负担和巨大经济损失。目前，肝癌最有效的治疗手段是手术切除，但是在我国，大部分患者在确诊时病程就已进入了中晚期，失去了手术治疗的机会。中晚期肝癌患者对常规放、化疗不敏感，而以索拉菲尼为代表的新型靶向治疗药物价格又过于昂贵且对患者预后改善不明显，使得这些治疗手段的应用受到限制，严重影响了患者的预后。因此，研发价格低廉的新型有效药物对于提高我国肝癌的治疗水平，减轻全社会的疾病负担具有重大的现实意义。微小RNA(miRNA)是一种内源性非编码小R

6、NA，大小约17—25个核苷酸(nt)，在生物界广泛存在。miRNA的生物合成比较复杂，首先由RNA聚合酶II催化合成皿iRNA的初始转录子(pri—miRNA)，然后pri—miRNA在细胞核中被核酸酶RNaseIIIDrosha切割成为前体miRNA(pre—miRNA)。经过进一步剪切后，pre—miRNA在转运蛋白exportin-5的作用下由细胞核内转移到细胞质中，最后由另一种核酸酶RNaseIIIDicer进一步切割产生具有一定生物学功能的成熟体miRNA。miRNA通过与目标信使RNA(mRNA)非完全配对，导致目标mRNA降解或

7、者翻译受阻，从而调控靶基因的表达。miRNA对生物体的生长和发育起重要调节作用，其表达异常与多种疾病发生发展密切相关。大量研究发现，miRNA在很多肿瘤中异常表达，与肿瘤细胞的增殖、抗凋亡、侵袭和转移等生物学特性联系密切。肝癌的发生发展也与miRNA异常表达密切相关。那么，调节异常表达的miRNA使其恢复至正常水平，是否有可能逆转肿瘤的恶性增殖、侵袭和转移等生物学特性呢?KotaJ等的研究首度为我们揭示了这种可能。他们发现miR一26a在HCC中异常低表达，在免疫缺陷鼠肝癌模型中人为高表达miR一26a，可以特异性的诱导肿瘤细胞凋亡，明显延缓肿

8、瘤进展。该研究证明以miRNA为肿瘤治疗靶点可以通过诱导肿瘤细胞凋亡等途径，取得良好的治疗效果，宣告了以miRNA为治疗靶点的分子靶向治疗新时代的来临