mir-124及靶基因在癫痫发作中的作用及功能研究

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1、重庆医科大学博士学位论文miR--124及靶基因在癫痫发作中的作用及功能研究姓名：罗晶申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：王学峰201205重庆医科大学博士研究生学位论文miR．124及靶基因在癫痫发作中的作用及功能研究l摘要第一部分miR．124在颠叶癫痫患者及动物模型中表达研究目的：研究miR-124在难治性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中表达及miR-124在氯化锂．匹鲁卡品诱导的颞叶癫痫大鼠模型海马脑组织中表达的变化规律。方法：1．从本课题组建立的癫痫脑库中随机抽取10例难治性癫痫患者颞叶脑组织标本和6例年龄性别匹配的对照组颞叶脑组织标本。2．成年雄性SD大鼠，随机

2、分为正常对照组(n=8)与癫痫组(亚组：6h组、1d组、2d组、3d组、7d组，各组n=8)，经腹腔给予氯化锂一匹鲁卡品注射，构建颞叶癫痫动物模型。3．荧光定量PCR检测miR-124在人颞叶脑组织中的表达和大鼠海马组织中的表达变化。结果：1．miR．124在颞叶癫痫患者中表达：与对照组相比，miR-124在难治性癫痫患者脑组织中表达水平显著降低(P

3、h组、1d组、2d组、3d组、7d组)，miR-124表达均降低(尸

4、腹腔注射建模前随机分组，分别给予：A组．microRNAagomiro．2nmol、B组．microRNAagomiro．6nmol、C组．microRNAagomir1．0nmol；2．应用荧光定量PCR和免疫荧光技术检测agomir干预效率，确定干预有效后进行建模；3．采用匹鲁卡品腹腔注射建模，观察注射后大鼠行为学改变。结果：1．agomir体内干预效果检测：激光共聚焦显微镜观察发现，在miR-124agomir立体定位注射后，大鼠海马神经元内可见CY3标记的miR-124agomir红色荧光；荧光定量PCR结果显示，使用1．0nmol4重庆医科大学博士研究生学位论文

5、agomir海马注射后大鼠海马中miR-124相对水平较NC组和AC组表达升高40～50％，差异有统计学意义(尸<0．05)；2．大鼠行为学观察：大鼠腹腔注射匹鲁卡品后即开始观察其行为学，各组发作达到四级及以上只数比显示：对照组(7／8)AC组(8／8)、O．2nmolAG组(7／8)、0．6nmolAG组(5／8)、1．0nmolAG组(4／8)。发作潜伏期结果显示：NC组(20．43±7．61s)，AC组(21．63±6．02s)禾IO．2nmolAG组(26．57±11．12s)，三组间平均发作潜伏期比较无明显改变，差异无统计学意义(尸>0．05)；0．6nmolA

6、G组(32．2+4．97s)平均发作潜伏期较AC组降低，但差异无统计学意义(尸>O．05)；1．0nmolAG组(52．25±12．66s)平均发作潜伏期较AC组延长，且差异具有统计学意义(尸

7、大鼠进行双侧海马立体定位注射干预，了解miR．124在体内水平改重庆医科大学博士研究生学位论文变对大鼠海马神经元痫样放电的影响。通过全细胞膜片钳技术和分子生物学技术，研究大鼠模型离体脑片电生理学指标和脑内分子生物学指标的改变，探讨miR0124对大鼠神经元兴奋性的影响及对其靶基因CREB的影响。方法：用匹鲁卡品对miR-124agomir及agomircontrol干预后的大鼠进行腹腔注射建模，应用膜片钳技术检测各组大鼠海马脑片的放电情况：动作电位(AP)，微小兴奋性突触后电流(mEPSC)，诱发兴奋性突触后电流(eEPSC，