低血糖对不同日龄新生大鼠脑组织mbp、caspase-3表达的影响

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1、郑州大学硕士学位论文低血糖对不同日龄新生大鼠脑组织MBP、caspase--3表达的影响姓名：范甜申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：徐发林201205摘要低血糖对不同日龄新生大鼠脑组织MBP、caspase．3表达的影响ji汐HIuJ研究生：范甜导师：徐发林副教授专业：儿科学院系：第三临床学院河南郑州450052摘要背景和目的新生儿低血糖性脑损伤，又称新生儿低血糖性脑病，是导致新生儿期脑损伤较常见的原因，具有较高的发病率与致残率。近年来新生儿期碳水化合物代谢紊乱，引起国内外学者的广泛关注。新生儿低血糖的平均发生率约为3％一11％，在高风险的患几中发

2、病率高达25％-33％。国外数据显示，在正常足月儿中发病率约为1-5％，而在早产儿和小于胎龄儿，低血糖的发生率可达到15-25％左右。国内研究表明，早产儿、低出生体重儿，低血糖的发病率约17．49％一27．08％，小于胎龄儿的发生率为22．22％。在低血糖的早期阶段，大部分健康新生儿由于内分泌调节功能通常不会造成严重的脑损伤，但持续或反复低血糖，则有可能造成视力障碍，认知障碍，枕叶癫痫，脑瘫及其他神经系统后遗症。文献表明，严重的持续性低血糖(>30min)可引起中枢神经系统的神经元坏死，并可以在MRI图像上出现基于脑白质的病变。如果没有及时发现和纠正，低

3、血糖脑损伤可能会导致严重的短期和长期的后果，严重时甚至危及生命，增加社会的负担，影响个人与社会的发展。本研究通过对反应白质髓鞘化指标的MBP、反应细胞凋亡指标caspase-3的检测，旨在探讨在低血糖后不同成熟脑组织的影响及机制，为临床低血糖脑损伤的防治提供依据。摘要材料与方法(1)选取20只SPF级SD大白鼠，动物许可证号为SCXK(豫)2010—0002，体重位于1809一2209之间，将4只雄性大白鼠与16只SD雌性大白鼠按雄性：雌性=l：4的比例同笼，第二日清晨取雌性大白鼠阴道分泌物进行显微镜下观察，以显微镜下看到精子作为雌鼠怀孕的第l天，并做好

4、预测新生鼠出生日期的记录。(2)把体重约5-69的新生大鼠，完全随机设计编入3组，每组为16只。A组：为对照组，给予下注射生理盐水，体积与所计算胰岛素注射液的体积相同，注射完后继续放入母鼠笼中正常喂养。B组：为模拟早产脑组(2日龄)，。自生后第2日(P2)起，P2、P4、P6分别皮下注射胰岛素注射液(剂量为15U／kg)。C组：为模拟足月脑组(9日龄)，自新生大鼠9日龄起，P9、P11、P13分别皮下注射胰岛素注射液(按剂量为15U／kg计算)。以注射后0．5h、2．5h分别检测血糖，经尾静脉测微量血糖水平低于2mmol／L为造模成功。(3)造模成功后，

5、每组随机选取6只大鼠行左心室血动脉血气分析，以除外缺氧缺血造成的损伤，余大鼠放回母鼠笼中正常饲养，至大鼠生长至21日龄时，处死并取脑观察。(4)常规石蜡包埋，自前额叶起切片，每隔50张留片，一直切至枕叶为止，切片厚度设定为5um，切片后进行MBP、caspase-3免疫组织化学染色观察，分别观察额叶、顶叶、枕叶等不同脑区的损伤情况，并进行染色区域的灰度测量。(5)统计学方法：采用SPSSl3．0统计分析软件进行数据分析，多组数值变量资料均采用均数±标准差方法(；±s)表示，两均数间的比较采用两独立样本t检验，多组变量资料的比较，采用单因素方差分析(One

6、WayANOVA)，组间两两比较行LSD．t检验，以a=O．05为统计学检验标准。结果三日木1．注射胰岛素注射液之后，实验组大鼠的动脉血氧分压平均值分别为57．10±2．2256mmHg、55．6380"+"1．65mmHg，对照组大鼠动脉血氧分压的平均值为57．47+1．3327mmHg，三者差异无统计学意义(产O．54)。注射胰岛素后，实验组大鼠的血糖水平分别为1．7814±0．1803mmol／L、1．7314±0．2188mmol／L、Il摘要1．7414___0．1313mmol／L，与注射前差异有统计学意义(P=-0．00)。2．21日龄时，

7、9日龄大鼠皮层下白质区MBP相比对照组及2日龄组表达明显减少，额叶区、项叶区及枕叶区的平均灰度值分别为162．17±8．63、154．35±5．66、138．66±5．14：132．39±5．48、112．90±11．51、93．64±7．39：133．63±5．90、119．92+7．80、94．50+4．26，差别有统计学意义(P=-0．00)。3．21日龄时，多个脑区，包括枕叶、额叶、顶叶等不同皮质区均可看到神经元的凋亡，额叶、顶叶、枕叶区各组大鼠caspase-3表达的平均灰度值分别为135．784-5．264、121．454-3．587、97．

8、67+8．396：165．454-5．23、153．76-a：7．64、127．