宝坻大蒜愈伤组织诱导及植株再生体系优化

《宝坻大蒜愈伤组织诱导及植株再生体系优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、宝坻大蒜愈伤组织诱导及植株再生体系优化摘要：以宝坻大蒜发芽叶为外植体，比较了不同培养基的诱导效率，优化了愈伤组织诱导及植株再生体系。试验结果表明，诱导愈伤组织的最佳培养基为ms+2，4-d2.0mg·l-1+naa2.0mg·l-1+kt1.0mg·l-1；诱导不定芽的最佳培养基为ms+6-ba1.5mg·l-1+naa1.0mg·l-1+kt1.5mg·l-1；诱导生根的最佳培养基为ms+naa0.6mg·l-1+kt0.5mg·l-1。关键词：宝坻大蒜；发芽叶；愈伤组织；快繁中图分类号：q945.41文献标识码：adoi编码：10.3969/j.issn.1006-6500

2、.2013.03.003大蒜是百合科葱属2年生草本植物，有很强的食用和医疗保健价值。大蒜种质资源丰富、优良品种众多。但由于采用无性繁殖，繁殖系数低，病毒易积累和传播，造成品种退化甚至濒临灭绝，且不能进行杂交育种，使其遗传学和生物学多样性得不到充分利用。因此，进行种质资源创新和新品种培育具有重要意义。目前已在系统选育[1]、理化诱变[2-3]、有性生殖[4]等方面开展了研究。大蒜脱毒快繁技术能有效地防止大蒜品种退化，保持优良种性，提高繁殖系数，已建立了较为完善的脱毒培养方法体系[5-7]，但有关宝坻大蒜的脱毒快繁技术研究报道较少，主要以花梗[8]、发芽叶[9]为外植体进行组织培养

3、。宝坻大蒜‘六瓣红’是津沽名优特产之一，是全国大蒜营养价值最高的品种。本研究利用组织培养快繁技术，以宝坻大蒜发芽叶为外植体进行愈伤组织诱导及植株再生，优化了快繁培养基体系，提高了愈伤组织诱导率，为宝坻大蒜的脱毒快繁和种质创新打下基础。1材料和方法1.1试验材料宝坻大蒜‘六瓣红’。1.2试验方法1.2.1培养基的配置以ms培养基为基本培养基，添加不同种类和浓度的激素，ph值为5.8；高温高压灭菌20min；待冷却至60℃时，分装到200ml的组培瓶中，每瓶约40ml，封口备用。1.2.2外植体的消毒选取生长健壮、无病虫害的大蒜蒜头，剥去外面鳞叶，挑取个大、饱满、无病斑的新鲜蒜瓣，

4、清水中培养24h，用流动的自来水冲洗20min左右，用蒸馏水冲洗1遍，0.1%的升汞消毒10min，再将其在75%浓度酒精中浸泡5min，用双蒸水洗3次，备用。1.2.3接种及愈伤组织诱导接种前，紫外线消毒30min。切取大蒜发芽叶，接种到培养基上，置于人工气候箱中培养。每瓶接种5个发芽叶，每个处理10瓶，共设21个处理。培养条件为日温25℃，夜温20℃，光强1500lx，光照时间14h·d-1，培养4周后进行观察统计。1.2.4愈伤组织的增殖及不定芽的分化待出现愈伤组织后，每隔20～25d继代1次，选取继代2次的愈伤组织转入诱导不定芽分化的ms培养基中，每瓶接种4块愈伤组织，

5、每个处理5瓶，共设9个处理。4周以后观察分化生长情况，并统计不定芽分化数。1.2.5生根培养将分化出不定芽后的绿苗转入生根培养基，诱导生根，生根培养基共设8个处理，2～3周后统计生根条数。2结果与分析2.1大蒜发芽叶愈伤组织类型大蒜发芽叶接种28d左右可以诱导出愈伤组织，愈伤组织大致有以下4种类型：白色雪花状、质地松散的愈伤组织（图1-a）；半透明、呈浆糊状的光滑型愈伤组织（图1-b）；呈浅黄色瘤状突起，质地较致密的愈伤组织（图1-c）；红褐色、较致密的愈伤组织（图1-d）。本试验中，前3种类型的愈伤组织在继代培养过程中，出愈率较高，容易成活，而第4种红褐色致密愈伤组织不发生分

6、化，保持原状或褐化死亡。2.2不同激素配比对诱导大蒜发芽叶愈伤组织的影响2，4-d是人工合成的植物激素，调节植物生长，利于愈伤组织的诱导，但不利于愈伤组织的增殖和分化。由表1可以看出，处理1～9中，2，4-d的浓度较低，形成愈伤组织缓慢且出愈率较低；处理12的出愈率最高，达到98%，当2，4-d的浓度为3.0mg·l-1时（16～21号培养基），愈伤组织形成个数稍有降低，愈伤组织结构松散易碎。naa和kt作为细胞分裂素，在大蒜发芽叶愈伤组织形成过程中也起着重要的作用，其不同的浓度配比对愈伤组织诱导具有一定的影响。当培养基中naa浓度为2.0mg·l-1，kt的浓度为1.0mg·

7、l-1时愈伤组织发生效果较好。何俊英等[9]以发芽叶为外植体，用2mg·l-12，4-d和0.5mg·l-1kt诱导愈伤组织，出愈率30%左右；利用贮藏叶+发芽叶诱导愈伤组织，出愈率90%左右。本研究调整了愈伤组织诱导的激素配比，出愈率达到98%。因此，诱导大蒜发芽叶愈伤组织的最佳培养基为ms+2，4-d2.0mg·l-1+naa2.0mg·l-1+kt1.0mg·l-1。2.3不同激素配比对发芽叶愈伤组织不定芽分化的影响从表2可以看出，将继代两次生长旺盛的致密愈伤组织转入不同激素配比的分化