二硫化碳对雄性大鼠睾丸生殖细胞线粒体相关途径细胞凋亡的影响

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1、华中科技大学硕士学位论文英文缩写NO.英文缩写中文1△Ψm线粒体跨膜电位2ADP二磷酸腺苷3AIF凋亡诱导因子4AP过硫酰胺5Apaf-1凋亡酶激活因子-16ATP三磷酸腺苷7Caspase半胱天冬酶8cDNA互补脱氧核糖核酸9CS2二硫化碳10CytoC细胞色素C11DNA脱氧核糖核酸12ELISA酶联免疫吸附法13HRP辣根过氧化物酶14MPT线粒体通透性转换15MPTP线粒体通透性转换孔16mRNA信使核糖核酸17NO一氧化氮18NOS一氧化氮合酶19OD光密度20PMSF苯甲基磺酰氟21Proc

2、aspase半胱天冬酶原22PVDF聚偏二氟乙烯23qPCR荧光实时定量聚合酶链反应24RNA核糖核酸1华中科技大学硕士学位论文25ROS氧化活性物26SDS十二烷基硫酸钠27Smac线粒体二级半胱天冬酶激活因子28UDG尿嘧啶-脱氧核糖核酸糖基化29WB蛋白免疫印迹分析2华中科技大学硕士学位论文二硫化碳对雄性大鼠睾丸生殖细胞线粒体相关途径细胞凋亡的影响硕士研究生：黄晓彧导师：陈国元教授摘要目的：探讨不同浓度CS2亚慢性染毒对大鼠睾丸生殖细胞线粒体途径细胞凋亡的影响。方法：清洁级健康SD雄性大鼠24只，

3、随机分为4组，CS2染毒浓度分别为0、50、250、31250mg/m，静式吸入染毒，每周5天，每天2小时，共10周。染毒结束后，断头处死动物，提取睾丸生殖细胞中胞浆蛋白，WB法检测AIF、CytoC、Bcl-2、Bax、Procaspase-9/3含量；提取总蛋白，分光光度法检测Caspase-9/3酶活性；提取线粒体蛋白，ELISA法检测MPTP及线粒体中呼吸酶复合物I-V的表达水平；提取总RNA，应用qPCR法检测AIF、CytoC、Bcl-2、Bax、Procaspase-9/3等各基因相对表达

4、水平。结果：与对照组相比，各染毒组大鼠睾丸生殖细胞胞浆中CytoC含量上升（P<0.05）；在中浓度组中，Bax/Bcl-2比值、Caspase-9/3酶活性上升，Procaspase-9/3蛋白的表达水平下降（P<0.05）；在高浓度CS2作用下，Bax和AIF蛋白的相对表达水平上升，而Bcl-2蛋白表达水平则下降（P<0.05）。与对照组相比，各染毒组大鼠睾丸生殖细胞中MPTP水平有明显的下降（P<0.05），线粒体内呼吸酶复合物I-V表达水平上升（P<0.05）。与对照组相比，各染毒组动物睾丸生殖

5、细胞中Caspase-9及BaxmRNA表达水平上升（P<0.05），Bax与Bcl-2mRNA表达水平之比亦升高（P<0.05）；在高浓度CS2作用下，睾丸生殖细胞中CytoC、Caspase-3和AIFmRNA相对表达水平上升，而Bcl-2mRNA表达水平则有明显下降（P<0.05）。结论：CS2染毒可影响雄性大鼠睾丸生殖细胞线粒体途径的细胞凋亡过程。关键词：二硫化碳；睾丸生殖细胞；细胞凋亡；线粒体；呼吸酶复合物3华中科技大学硕士学位论文EffectofCarbonDisulfideonTestic

6、ularGermCellApoptosisMeditatedbyMitochondrionRelatedPathwayinMaleRatsCandidate:XiaoyuHuangSupervisor:Prof.GuoyuanChenAbstractObjective:Toinvestigatetheeffectofmitochondriononapoptosismedicatedbycarbondisulfideintesticulargermcellinmalerats.Methods:Twenty

7、fourSDmaleratswererandomlydividedintofourCS2treatedgroups.3RatswereexposedtomultiplelevelsofCS2concentration(0,50,250,1250mg/m)byinhalationfor10weeks,5d/w,2h/d.Aftertreatment,ratsweresacrificedbydecapitation.Cytoplasmproteinintestiswasextractedfordetecti

8、ngthelevelsofAIF,CytoC,Bcl-2,Bax,Procaspase-9/3bywesternblot.MitochondrialproteinwasextractedtodetectthelevelofMPTPandmitochondrialrespiratorychainenzymecomplexI-IVbyenzyme-linkedimmunesorbentassay.Proteinintestiswasextrac