DB32∕T 3306-2017 蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程

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1、ICS65.020.20B61备案号：56880-2017DB32江苏省地方标准DB32/T3306—2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程TechniqueregulationfortheVirus-freeplantletproductionofBlueberry2017-09-25发布2017-10-25实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T3306—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构及编写》给出的规则编写。本标准由江苏农林职业技术学院提出并归口。

2、本标准由江苏农林职业技术学院起草。本标准主要起草人：王永平、宗树斌、刘玉华、许建民、王珊、任焕焕。IDB32/T3306—2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程1范围本标准规定了蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程的脱毒、外植体消毒、初代培养、病毒检测、继代培养、壮苗培养、驯化生根、上钵、苗期管理、生产记录等。本标准适用于全省蓝莓组培脱毒种苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于

3、本文件。GB/T8321(所有部分)农药合理使用准则3脱毒3.1母株选择具有品种典型特征特性、生长势强、目测无病症的优良单株。3.2热处理钝化病毒取母株的侧枝嫩梢，放入病毒钝化处理器，60℃热击10s。4外植体消毒将经热处理的嫩梢剪取放入烧杯，纱布封口，自来水冲洗30min～60min，用75%乙醇浸润130s后，用无菌水洗净，再放入5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min后，用无菌水冲洗5次，再用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用。5初代培养5.1初代培养基WPM+IBA0.

4、05mg/L+ZT0.5mg/L，pH5.0。5.2接种在超净工作台上，用已灭菌的剪刀、镊子将消过毒的外植体均匀分成1.5cm～2.0cm的小段，每段含1芽～2芽，接种于初代培养基中，每瓶5株～10株。注明品种、编号和接种日期。5.3培养条件1DB32/T3306—2017温度25℃±2℃、光照强度2000lx～3000lx、光照时间16h/d，培养100d～120d。6病毒检测抽取初代培养的蓝莓无菌苗进行蓝莓枯焦病毒(BLScV)、蓝莓急性坏死病毒(BLShV)、蓝莓鞋带病毒(BSSV)、蓝莓红环斑

5、病毒(BRRV)、蓝莓坏死环斑病烟草环斑病毒(TRSV)、蓝莓叶片斑点病毒(BLMV)的病毒检测。检测方法采用PCR/RT-PCR。无病毒苗作为核心种苗继代扩繁培养。7继代培养7.1继代培养基WPM+NAA0.5mg/L+ZT1mg/L，pH5.0。7.2培养条件温度为25℃±2℃，光照强度1000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d。60d～90d培养一代，培养不超过15代。8壮苗培养8.1壮苗培养基WPM+IBA0.1mg/L，pH5.0～5.5。8.2培养条件温度为25℃±2℃，光

6、照强度2000lx～3000lx，光照时间14h/d～16h/d。培养90d～120d。9驯化生根9.1生根设施在苗床上搭建高度50cm的小拱棚，安装喷灌设备，苗床上面铺一层无纺布，拱棚上面覆盖塑料薄膜，上盖遮阳网。9.2基质选用苔藓作为专用基质，浸泡12h甩干，湿度控制在40%～60%，塞进5×10的穴盘内。9.3炼苗将培养瓶放入温室内，上盖一层遮阳网，封口炼苗7d,然后打开遮阳网，把瓶盖拧松，再炼苗7d。9.4扦插选择生长健壮、长度5cm以上、木质化程度好的组培苗进行扦插，先用清水清洗掉培养基，剪

7、去根部膨大部分，去掉下部三分之一的叶片，在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min，然后用镊子捏住插穗基部，插入塞好苔藓的穴盘内压紧。每穴1株，插入的深度为2cm～3cm。2DB32/T3306—20179.5插后管理插后立即喷水1次。15d内每天叶面喷水2次～3次，相对湿度控制在80%～100%，15d后开始生根并长出新叶，每天喷水1次，湿度控制在70%左右，30d后去掉拱棚上的遮阳网和塑料薄膜，湿度控制在60%左右。温度控制在20℃～30℃。10上钵10.1栽培容器选用13×12黑色

8、软质营养钵为宜。10.2栽培基质壤土、草碳土、腐锯末按3:1:1的体积比例混合，加入硫磺粉均匀混拌。1m3基质使用硫磺粉0.75kg～1kg将基质pH值调至4.5～5.5。10.3上钵时间须根长至3cm，苗高超过10cm时进行上钵移植。10.4上钵移植先装填基质至营养钵的1/3处，然后把苗从穴盘内取出放到营养钵的中央扶正，再把四周填满基质，稍用力压紧，使基质低于营养钵上沿2CM～3cm。每钵一株，浇透水。11苗期管理11.1温湿度管理白天温度25℃～30