酸性环境下雷公藤内酯醇对舌癌中单核巨噬细胞功能影响的实验研究

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1、贵阳医学院2012届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R739.86学号：S090485贵阳医学院2012届士硕士学位论文酸性环境下雷公藤内酯醇对舌癌中单核/巨噬细胞功能影响的实验研究研究生：张玉波导师：宋宇峰教授冯红超教授年级：2009级专业：口腔临床医学本课题受以下资金资助贵州省教育厅自然科学研究项目黔教高发（2010）305号2012年5月25日第1页共42页贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要……………………………………1前言„„„„„„„„„„„„„„2材料和方法„„„„„„„„„„„„4

2、结果„„„„„„„„„„„„„„9讨论„„„„„„„„„„„„„„18参考文献„„„„„„„„„„„„„23英文摘要„„„„„„„„„„„„„27致谢„„„„„„„„„„„„„28缩略词表„„„„„„„„„„„„29论文原创性声明„„„„„„„„„30附：综述„„„„„„„„„„„31第2页共42页贵阳医学院2012届硕士研究生论文酸性环境下雷公藤内酯醇对舌癌中单核/巨噬细胞功能影响的实验研究专业：口腔临床医学研究生：张玉波导师：宋宇峰教授冯红超教授摘要：目的：研究在酸性环境中，雷公藤内酯醇（triptolide，TP）对人单核/巨噬

3、细胞系（THP-1细胞）、与共培养的舌鳞癌Tca8113细胞的作用，以及对血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子-C（VEGF-C）分泌的影响。方法：在不同浓度及不同pH值（6.6、6.8、7.2）条件下TP分别与单核/巨噬细胞（THP-1）、单核/巨噬细胞（THP-1）+舌鳞癌Tca8113细胞及舌鳞癌Tca8113细胞共同培养24小时、48小时、72小时后，收集上清液，Elisa法检测细胞培养上清液中VEGF、VEGF-C含量；MTT法检测不同条件下TP干预后单核/巨噬细胞及舌癌细胞数量的变化。结果：1、在酸性微环境下，T

4、P可促进单独培养的单核/巨噬细胞增殖，呈时间、浓度、pH值相关性(P＜0.05)；2、单核/巨噬细胞与口腔鳞癌细胞混合培养（含不同浓度的TP）时，随着pH值增大及培养时间的延长细胞数量先增加后减少。当TP浓度为50ug/ml时每组细胞数量均明显减少。3、单核/巨噬细胞单独培养和与口腔鳞癌细胞混合培养后VEGF()、VEGF-C分泌随pH值增大及培养时间的延长而减少；4、单核/巨噬细胞单独培养和与口腔鳞癌细胞混合培养细胞的数量随TP浓度的增加而增加，但50ug/ml时细胞数量及细胞因子VEGF、VEGF-C值明显减少；5、在舌癌细胞培养

5、环境中，细胞数量均呈下降趋势。结论：低浓度（≤20ug/ml）TP对单核/巨噬细胞既具有促进增殖作用又抑制VEGF、VEGF-C分泌，并与时间、pH值、TP浓度呈相关性，这可能是TP能够使肿瘤环境中的单核/巨噬细胞由M2型转化为M1型而增强免疫作用有关,使单核/巨噬细胞分泌促瘤因子受到了抑制，参与了抑瘤作用；TP对舌鳞癌细胞具有杀伤作用。关键词：单核/巨噬细胞口腔鳞状细胞癌酸性微环境雷公藤内酯醇VEGFVEGF-C第3页共42页贵阳医学院2012届硕士研究生论文前言肿瘤是一类严重威胁人类健康的常见病、多发病，口腔颌面部的恶性肿瘤以癌最

6、为常见，其中又以鳞状细胞癌为最多见，一般占80%以上，占头颈部恶性肿[1]瘤的40％左右。肿瘤的生长是一个复杂的多因素参与的过程，常向区域淋巴结转移，晚期可发生远处转移。在实体肿瘤中研究发现，肿瘤细胞和间质的相互作[2]用在肿瘤的生长中起重要的作用。肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophages,TAMs)是存在于实[3]体肿瘤组织中的数量最多的一种具有特殊表型和功能的巨噬细胞。其来源于外周血单核/巨噬细胞，是构成实体肿瘤的主要成分。在体外常规条件下的研究表[4]明，单核/巨噬细胞对肿瘤细胞有吞噬和杀伤作用，

7、同时在肿瘤中还起呈递肿瘤相关抗原发挥免疫监视和抗肿瘤作用。但越来越多的研究表明，肿瘤组织内的TAMs可以通过释放许多趋化因子和细胞因子促进肿瘤生长和血管、淋巴管生成，并且降解基质促进肿瘤侵袭和转移。本课题组前期的研究中发现：在酸性微环境[5]下，单核/巨噬细胞对癌细胞的杀伤作用明显减弱，研究表明单核/巨噬细胞功[6]能取决于它所处的微环境，在体内外不同的微环境影响下，表现出明显的功能[7-8]差异。活化的TAMs可经自分泌或旁分泌的调节而级联扩大,从而对肿瘤性血管生成产生重要的影响，当TAMs与肿瘤细胞共同培养时，可促进肿瘤细胞的增[

8、9]殖、浸润、血管和淋巴管转移。雷公藤系卫矛科雷公藤属多年生藤本植物。其活性成分主要在根部,是我国民间习用药材,已有近2000年的药用历史。近年发现该药有抗炎和抑制免疫的功效,开始用于自身免疫系统疾病的治疗,包括类风湿性