ercc1和ck在i期非小细胞肺癌中的表达对术后化疗的指导研究-肿瘤医学论文

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1、ERCC1和CK在I期非小细胞肺癌中的表达对术后化疗的指导研究-肿瘤医学论文ERCC1和CK在I期非小细胞肺癌中的表达对术后化疗的指导研究徐雯1吴敏2巢仙亮2徐全11.江西省人民医院胸外科，江西南昌330000；2.江西省上高县人民医院外科，江西上高336400[摘要]目的探讨I期非小细胞肺癌（Non-SmallCellLungCarcinoma，NSCLC）的术后个体化化疗，以提高肺癌的远期疗效。方法对该院2009年6月—2012年12月收治的78例Ⅰ期NSCLC且有微转移患者的石蜡包埋肿瘤标本进行肺癌组织ERRC1（excisionrepaircross-comple

2、mentationgroup1）及细胞角蛋白（Cytokeratin，CK）免疫组化检测，并进行术后个体化化疗，分析上述指标表达对患者化疗反应率及生存率的关系，探讨其对指导术后化疗的意义。结果全部患者CK检测均为阳性，阳性率100.0%；ERRC1阴性表达者42例（53.8%），ERRC2阳性表达者36例（46.2%）；2009年6月-2012年12月，共有235例Ⅰ期NSCLC患者在该院就诊，经治疗及CK检测阳性确定微转移患者共78例，转移率33.2%；阳性组3年复发18例，转移30例，生存率61.1%，阴性组复发20例，转移34例，生存率69.0%，两组患者复发、转移

3、、生存率比较均无明显统计学差异。结论ERCC1和CK检测有助于客观评价患者预后，合理应用多学科综合治疗，避免不必要的医疗资源的浪费，具有巨大的经济和社会效益，值得广泛推广。关键词ERRC1；细胞角蛋白；I期非小细胞肺癌；表达；化疗；指导[中图分类号]R734[文献标识码]A[文章编号]1674-074２（２０１3）05（b）－０055-02目前临床对于I期非小细胞肺癌术后是否化疗仍存在较大争议，多数学者均认为[1]，微转移是一个影响预后的独立因素[1]，而目前临床TNM分期仍未将微转移作为一个分期的指标，因此，为探讨微转移患者个体化化疗效果，该院对2009年6月-2012

4、年12月收治的78例Ⅰ期NSCLC且有微转移患者的石蜡包埋肿瘤标本进行肺癌组织ERRC1及CK免疫组化检测，并进行术后个体化化疗以期改善这部分患者的预后，现将研究过程与结论报道如下。1临床资料选取该院收治的经胸外科根治手术（肺叶或全肺切除、系统性淋巴结清扫术）且经常规病理检查存在微转移的I期NSCLC患者[2]，共78例，男性48例，占61.5%，女性30例，占38.5%，年龄39~71岁，平均年龄（55.8±13.6）岁。病理分型：鳞癌38例（48.7%），腺癌29例（37.2%），腺鳞癌11例（14.1%）；吸烟史：无吸烟史42例（53.8%），3年以下19例（24.

5、4%），3年及以上17例（21.8%）。2研究方法2.1CK检测2.1.1标本准备将石蜡包埋组织标本置于-4℃冰箱内，冷冻后取出，制成2张组织薄片，厚度均为5μm，将其置于多聚赖氨酸处理过的载玻片上，经摊片、烤片后进行CK免疫组织化学染色。2.1.2免疫组织化学染色步骤①采用常规脱蜡法将石蜡切片水化；②将30%H2O21份与蒸馏水10份混合，室温放置5～10min以灭活内源性酶，灭活后使用蒸馏水清洗3次；③将切片浸入0.01mol枸橼性酸盐缓冲液中，微波炉加热至沸腾后停止，每隔10min重复一次，共计2次。待切片冷却后，使用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次；④滴加5%双(三

6、甲基硅基)乙酰胺(BSA)封闭液，室温静置20min后甩去多余液体，无需洗涤；⑤滴加稀释的一抗，37℃静置1h后，使用PBS洗涤3次，每次2min；⑥滴加生物素化二抗，于室温下静置20min后使用PBS洗涤3次，每次2min；⑦滴加试剂SABC，20～37℃静置20min后使用PBS洗涤4次，每次5min；⑧DAB显色:取1mL蒸馏水，分别添加加试剂盒中A，B，C试剂各1滴，混匀后加至切片，室温显色，镜下控制反应时间在20min左右，反应完毕后使用蒸馏水洗涤；⑨苏木素轻度复染[3]；脱水，透明，封片，待检。2.1.3染色结果评判标准阳性结果为细胞膜及细胞浆出现棕黄色显色，

7、且切片中出现1例CK染色阳性的细胞，则认为结果呈阳性，即淋巴结中有微转移灶的存在。2.2CK检测阳性标本再行ERCC1检测2.2.1方法鼠抗人ERCC1单克隆抗体由上海长岛生物技术有限公司提供。①石蜡切片经常规脱蜡水化后，使用3%的H2O2温育20min，以灭活其内源性过氧化物酶，使用蒸馏水洗涤3次，每次洗涤时间约为5min；②微波抗原修复约5min，使用0.1mol/LPBS洗涤3次，每次5min；③滴加正常血清封闭液，室温温育30min后将多余液体倒出；④滴加1∶80鼠抗人ERCC1单抗(稀释倍数1∶100)，37℃1h，