力学刺激对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的研究

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1、力学刺激对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的研究计：学位论文：27页表格：O个插图：12幅林天指导教师：张卫国教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：外科学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明IIIIIIIIIIIIIIIIIIIY2283071本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也

2、不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：型丝签字日期：业年￡月丑El关于学位论文使用授权的说明《七磊1缎耐襁吲之欧枷Jl犯响轵智细J

3、犯批奶确宕。》系本人在大连医科大学攻读(博士、硕士)学位期间在导师指导下完成的学位论文。本人及指导教师完全了解大连医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅，同意学校将本论文加入：1

4、．中国学术期刊(光盘版)电子杂志社——《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》及CNKI相关数据库。2．中国科学技术信息研究所——《中国学位论文全文数据库》3．国家图书馆本人授权大连医科大学，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文，可以公布论文的全部或部分内容。薹喜耋需蓁茎：一指导教师签名：．§五星!上＼签字日期：翟!三年』月五日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯0O0OD⋯⋯13(五)结论⋯0ODOOOO00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00QO00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-⋯⋯⋯⋯⋯⋯··27力学刺激对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的研究硕士生姓名：林天指导教师：张卫国教授指导小组：王寿宇副教授专业名称：外科学摘要目的：在微团培养条件下探讨不同离心力对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响与作用。方法：取6周龄的SD大鼠，在无菌条件下分离

7、出股骨和胫骨并抽取骨髓，使用密度梯度离心法提取原代BMSCs，并经过反复换液和传代得到纯化的BMSCs，使用流式细胞仪测出CD29,CD90和CD45的含量，鉴定细胞的纯度。取第6代BMSCs采用微团方式进行立体培养，在培养过程中更换以TGF．pl，ITS为主要成分的诱导培养基并根据离心力强度将细胞分为4组：无应力对照组、1009应力组、2009应力组和3009应力组。诱导培养28天后，对细胞团块进行鉴定和比较。鉴定指标主要为大体观察细胞团块的形态、光泽度等；台盼蓝染色测定细胞活度；甲苯胺蓝染色测定蛋白聚糖的合

8、成和II型胶原免疫组化检测H型胶原含量。结果：1、BMSCs原代细胞早期接种时，细胞呈类圆形，48小时后少许细胞贴壁，并逐渐延伸成长梭性。约7日后即可见明显的集落形成，与周围的集落渐渐的融合，2周后，细胞基本融合达90％，排列紧密而有序，至第5代时细胞形态更加规矩，单个细胞已成一致的狭长梭形，排列紧密有序，集落中心呈旋涡状生长。2、BMSCs流式细胞仪检测结果：CD29表达率为97．36％，CD90表达率为99．61％，均为强阳性反应；CD45表达率为0．44％为阴性反应。说明此BMSCs细胞样本纯度很高，符合

9、本实验要求。3、BMSCs经28天诱导后，于离心管底部肉眼可见的银白色小质块，，球形，略有光泽，用镊子夹之韧性较差，各分组间细胞团块的大小，色泽无明显差异。4、BMSCs经28天诱导后台盼蓝染色结果：无应力，1009，2009三组之间细胞活力无明显差异，而3009应力组的细胞活力则较前三组明显降低，具有统计学意义(p<0．05)。5、BMSCs经28天诱导后甲苯胺蓝染色：2009应力组