抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡对树突细胞结构和功能的影响

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1、抗生素诱导小鼠小肠茵群失衡对树突细胞结构和功能的影响计：学位论文：42页表格：9个插图：9幅李卫华指导教师：唐立教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：病原生物学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明嘲本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的

2、同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：趣聋签字日期：日三罩日刊k一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡对树突细胞结构和功能的影响硕士研究生：指导教师：指导小组：专

4、业名称：李卫华唐立教授文姝副教授病原生物学摘要目的：．通过分析小鼠小肠菌群失衡前后小肠中树突细胞的形态、数量、亚型及功能的变化，探讨菌群失衡对小肠中树突细胞的结构和功能的影响。方法：1．抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡的菌群检测：实验分为两组，正常对照组与菌群失衡组。正常对照组小鼠灌服无菌水，菌群失衡组小鼠灌服400mg／ml头孢曲松钠，每次0．2ml，每日2次，间隔6h，连续8d；分析小鼠小肠菌群，建立小鼠小肠菌群失衡模型。2．小鼠小肠树突细胞的分离、纯化(1)应用EDTA震荡法去上皮与IV型胶原酶消化法制备小肠粘膜单细胞悬液。(2)应用CDIlc免

5、疫磁珠法进行小鼠小肠树突细胞的分离、纯化。3．菌群失衡对肠道树突细胞的影响(1)透射电镜技术观察小鼠小肠粘膜中树突细胞形态的变化。(2)流式细胞术检测小鼠小肠粘膜中树突细胞上CDllc、CDllb、CD8a、MHC．II、CD86、CD80、CD40、CD83、CD205的变化。f3)RT—PCR技术检Nd,鼠小肠树突细胞上IL一10、1L．12mRNA水平的变化。结果：1．抗生素诱导小鼠小肠菌群失衡的菌群检测：通过抗生素头孢曲松钠的诱导可以建立稳定的小鼠小肠菌群失衡模型。菌群失衡后小鼠小肠菌群数量及种类明显减少。双歧杆菌、类杆菌、梭杆菌、韦荣球

6、菌、葡萄球菌的数量几乎降至零。2．小鼠小肠粘膜树突细胞的分离、纯化：经免疫磁珠分选系统分离纯化的树突细胞，光学显微镜下可观察Nd,肠中分离的树突细胞有大小不等的突起，由于多聚甲醛的固定作用，树突大多不明显。胶原酶消化与免疫磁珠分选后，经过两根MS柱纯度可达到55％．60％，连续多根柱子后纯度可更高。3．菌群失衡对小肠树突细胞的影响(1)对小肠树突细胞的形态的影响：固有膜正常对照组树突细胞有大小不等的伪足，细胞边缘清晰，细胞核不规则。菌群失衡组与正常对照组比较树突细胞伪足变短，细胞边缘模糊，不规则。细胞质变小。(2)对小肠树突细胞的结构的影响：菌群

7、失衡后小肠粘膜CDllc树突细胞的数量较正常对照组显著增高(尸巴O．o001)。CDllc树突细胞两种亚群较正常对照组均无明显变化CDllc+CDllb+(尸兰0．773)，CDllc+CD8a+(P=0．235)。(3)对小肠树突细胞的功能的影响：菌群失衡后小鼠小肠CDllc树突细胞上表达的CD205未见明显变化(产0．816)。CDllc树突细胞上表达的MHC—II、CD86、CD80、CD40均显著降低，其P值分别为O．0001、0．030、O．036、0．008。CDllc+树突细胞上表达的CD83显著降低沪=0．003)。CDl】c树突

8、细胞上IL．10表达明显升高，IL．12表达明显降低。结论：1。抗生素头孢曲松钠干扰肠道茵群，可建立小鼠小肠菌群失衡模型。2．利用MAC