哇巴因抗肿瘤生长作用及对a549细胞迁移的作用

《哇巴因抗肿瘤生长作用及对a549细胞迁移的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文哇巴因抗肿瘤生长作用及对A549细胞迁移的作用姓名：刘宁申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：李军霞201203中文摘要哇巴因抗肿瘤生长作用及对A549细胞迁移的作用摘要强心苷类药物是一类主要用于治疗心力衰竭和心房颤动的常用药物，作用靶点是Na+／K+．ATPase。二十世纪八十年代，Stenkvist等发现，在服用洋地黄类药物的妇女中，患乳腺癌的几率比不服用药物的患者要少很多，肿瘤细胞呈现更多的良性特征。Haux等在9271位服用洋地黄毒昔的。患者中发现，洋地黄毒苷的血药浓度越高，患

2、者患白血病、淋巴瘤以及肾脏或泌尿道肿瘤的风险越低。自此，一些学者开始关注强心苷类药物的抗肿瘤作用。地高辛、洋地黄毒苷等强心苷类药物可抑制多种肿瘤细胞的生长。一些研究认为，Na+／K+．ATPasea亚单位可能是强心苷类药物抗肿瘤作用的主要靶点，但Na+／K+一ATPase仅各亚型与强心苷类药物抗肿瘤作用之间的关系尚不清楚，在四个亚型中，更多的研究集中在0【1、以、仅3亚，型上。有研究报道，强心苷类的作用可能与其影响细胞内信号转导有关。本实验中，我们研究了Na+／K+．ATPase抑制剂哇巴因对肿瘤细胞生长的影响

3、以及与Na+／K+_ATPaseQ1、a2、a3关系，并进一步研究了哇巴因对Src／EGER通路的影响。肿瘤转移是恶性肿瘤的主要特征和导致癌症患者死亡的重要因素。来源于上皮组织的肿瘤细胞迁移到远处的过程中，经常发生上皮．间质化(EMT)，在EMT过程中，细胞的侵袭力增强，E．钙粘素(E．cadherin)、N．钙粘素(N．cadherin)和波形蛋白(Vimentin)是EMT的重要标志物。‘非小细胞性肺癌A549具有II型肺泡上皮的重要特征，EMT是A549获得侵袭和迁移能力的重要过程。本实验通过细胞划痕实验

4、和Transwell小室法来检测哇巴因对A549细胞迁移能力的影响，并研究哇巴因对E．cadherin、N．cadherin、Vimentin、Mc、佃．2(基质金属蛋白酶．2)、啪．9(基质金属蛋白酶．9)等蛋白表达的影响。一、哇巴因抑制肿瘤细胞生长作用与Na+／lf，ATPase仅亚基的关系目的：1、研究哇巴因抑制肿瘤细胞生长作用及其与Na+／K+-ATPaseal、a2、0【3亚基表达的关系。中文摘要2、研究哇巴因对Src、EGFR和P13K蛋白表达的影响。方法：本实验采用四甲基噻唑蓝法(MTT法)来研究

5、不同浓度的哇巴因对肿瘤细胞的生长抑制作用。采用蛋白免疫印迹法(westemblot)研究哇巴因对细胞Na+／K+．ATPaseal、a2、a3亚基、Src、、EGFR和P13K蛋白表达的影响结果：1、哇巴因可时间．浓度依赖性抑制四种肿瘤细胞的生长，对A549的抑制作用最为明显，其次是TE．1细胞和EC．109细胞，最弱的是SK．BR-3细胞。2、EC．109细胞Na+／K+．ATPaseal蛋白含量最多，其次是SK．BR-3和A549细胞，TE．1细胞含量最少；A549细胞Na+／K+．ATPasea2蛋白含量

6、最多，其次是EC．109、TE．1、SK．BR．3；四种细胞Na+／K+．ATPasea3蛋白含量无明显差别。3、Na+／K+．ATPaseal、a2和伐3抗体可阻断哇巴因对A549细胞的生长抑制作用。4、哇巴因可下调A549和SK．BR．3细胞中Na+／K+．ATPase0L1、a2和Q3蛋白表达。同浓度(100nM)哇巴因对A549的Na+／K+．ATPaseQl、a2和0【3蛋白下调作用比对SK．BR．3细胞要明显。5、哇巴因可下调A549和SK．BR．3细胞中Src、EGFR、P13K蛋白表达。同浓度(

7、100nM)哇巴因对A549细胞上述蛋白下调作用比对SK．BR．3细胞要明显。6、Src抑制剂PP2109M和P13K抑制剂LY294002509M不影响A549细胞Na+肘．ATPaseal、以、a3亚基的表达结论：哇巴因对肿瘤细胞的生长抑制程度不同与Na+／K+．ATPase0【1、0【2、a3含量无关；Na+／K+．ATPaseal、a2和仅3亚基都参与哇巴因对A549细胞的作用；哇巴因抑制生长作用可能与其下调Na+／K+．ATPase仅亚基、Src、EGFR和P13K蛋白有关。二、哇巴因对A549细胞迁

8、移的作用目的：研究哇巴因对人肺癌A549细胞迁移的作用。方法：通过细胞划痕实验和Transwell小室法来检测A549细胞的迁移能力；采用westernblot研究哇巴因对E．cadherin、N．cadherin、Vimentin、中文摘要舢．2、MMP．9等蛋白表达的影响。结果：1、在50ng／ml的EGF诱导后，细胞变得更为狭长，边缘伸出长角，细胞之间由原来的紧密连接变得松散。E