rna干涉转基因马铃薯抗卷叶病毒(plrv)抗病性研究

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1、分类号：密级：UDC：编号：2013100901020502010级攻读硕士学位研究生毕业论文RNA干涉转基因马铃薯抗卷叶病毒（PLRV）抗病性研究RNAinterferetransgenePLRVresistancestudy指导教师：王舰研究员学生姓名：龚磊论文类型：应用研究学科专业名称：作物遗传育种研究方向：马铃薯抗病研究学院(系、部)：农牧学院论文起止时间：2012.01—2013.05QinghaiUniversityMasterDissertationEvaluationofDroughtResistanceofPotatoVarietiesSuperviso

2、r:WangJianCandidate:GongLeiAcademicMajorApplidedfor:CropGeneticandBreedingSpecificMajor:potatodiseaseresistancestudyCollege(Department):QinghaiUniversityApril5,2013独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全

3、意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权青海大学大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于：保密□不保密□（请在相应方框内打―√‖），在_____年解密后适用本授权书。学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日青海大学硕士学位论文摘要摘要马铃薯卷叶病毒属黄化病毒组，由蚜虫以持久方式传

4、播，是马铃薯上最重要的病毒病害之一。马铃薯卷叶病毒可侵染马铃薯引起卷叶、黄化、矮缩、僵化及块茎网状坏死等症状，严重影响马铃薯的产量和品质，是一种世界范围的马铃薯的重要病害。RNAi是由dsRNA介导的基因沉默现象，是细胞内的一种防御机制，可特异地降解细胞内与之具有同源性的核酸，达到调节细胞内编码基因的表达的作用。由于RNAi具有抗病毒表现型为高抗或近似于免疫，抗病性更持久，生物安全性高等优点，具有更加广阔的应用前景。因此，探讨利用RNA介导抗性来培育抗病毒转基因马铃薯的这一新策略的可行性和应用价值具有重要的现实意义。本研究利用大田统计方法结合分子生物学手段和生物信息学手段

5、对本室转化的23个转RNA干涉载体马铃薯突变株进行抗病性鉴定。具体研究成果如下：1.通过大田试验发现了一些具有明显特征突变的转化体，如株高、叶片形态、产量等方面，说明转入的外源载体引起了原来马铃薯基因组的改变。2．利用酶联免疫法检测技术研究受侵染后马铃薯卷叶病毒基因在这些转化体中的表达情况，其中4p1-3、4p2-3、4p2-7、4号、5p1-6、5p2-6、5号为阳性，初步说明除这几个株系以外的株系均有一定的马铃薯卷叶病毒抗性，所转入的RNA干涉载体起到了一定的干涉PLRV作用。3.通过荧光定量PCR分子生物学实验研究，我们可以发现转RNA干涉载体均有不同水平的马铃薯卷

6、叶病抗性，但是抗性水平差异很大。其中4P1-3、4P2-3、4P2-7、5P1-6、5P2-1抗性水平较差，4P1-1、4P1-2、4P2-9、5p1-2、5p2-4抗性水平较高。4.整个实验可以验证RNA干涉这一技术策略的可行性，为得到对马铃薯卷叶病毒具有稳定抗性的马铃薯转基因植株提供依据。关键词：马铃薯卷叶病毒RNA干涉（RNAi）酶联免疫检测荧光定量PCRI青海大学硕士学位论文摘要II青海大学硕士学位论文AbstractAbstractThepotatoleafrollvirusbelongstotheyellowingvirusgroup,spreadbyaphi

7、dsinlastingways.Isoneofthemostimportantvirusdiseasesonthepotato,thepotatoleafcurlviruscaninfectpotatoleaf,yellowing,lowshrinkage,rigidandreticularnecroticsymptomssuchastubers,seriouslyaffectingthepotatoyieldandquality,isoneoftheimportantdiseasesofpotatoworldwide.RNA