脂联素通过调节巨噬细胞自噬水平发挥抗动脉粥样硬化的作用及机制

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1、单位代码：10025分类号：R54学号：122014000267密级：非密CapitalMedicalUniversity硕士学位论文脂联素通过调节巨噬细胞自噬水平发挥抗动脉粥样硬化的作用及机制Adiponectininhibitsatherosclerosisbyregulatingthelevelofautophagyinmacrophages研究生：任新宇学科专业：内科学（心血管病）指导教师：周玉杰教授导师单位：首都医科大学附属北京安贞医院完成日期：二〇一七年首都医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师

2、的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录一、中文摘要.......................................................1二、英文摘要.......................................................3三、正文

3、...........................................................5前言............................................................5材料和方法.....................................................6结果..........................................................12讨论.......................

4、...................................19参考文献......................................................22四、文献综述......................................................25五、附录（缩略词）................................................38六、攻读学位期间发表文章情况.....................................

5、.40七、致谢..........................................................41八、个人简历......................................................42首都医科大学硕士学位论文中文摘要脂联素通过调节巨噬细胞自噬水平发挥抗动脉粥样硬化的作用及机制背景及目的：脂联素（adiponectin，APN）已被证实具有保护血管内皮细胞、抗动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）、调节胰岛素抵抗等作用，本研究拟在细胞水平通过探究A

6、PN对巨噬细胞自噬水平的影响揭示其抗AS的新机制，为AS的临床治疗提供新靶点。方法：采用在体外培养人THP-1细胞系诱导的巨噬细胞，分为对照组，氧化低密度脂蛋白（Oxidizedlowdensitylipoprotein，ox-LDL）组及ox-LDL+APN组，给予细胞ox-LDL处理模拟斑块内环境后，采用CellCountingKit（CCK-8）方法检测ox-LDL对细胞的毒性，并使用蛋白质印迹方法（Westernblot，WB）检测细胞内自噬相关蛋白表达情况。在给予细胞APN，ox-LDL及自噬抑制剂3-MA处理后，使用WB

7、方法检测细胞内自噬相关蛋白表达情况，应用透射电子显微镜（TransmissionElectronMicroscope，TEM）观察巨噬细胞内自噬小体的形成情况，使用流式细胞术AnnexinV–PropidiumIodide（AnnexinV/PI）双染色法检测细胞凋亡发生情况。结果：CCK-8结果表明巨噬细胞存活率随ox-LDL浓度升高明显下降（P˂0.05），WB结果示给予ox-LDL处理后，细胞内自噬标记物LC3II的表达水平明显升高，呈浓度及时间依赖性，且在ox-LDL的浓度为30mg/L和孵育时间为6h时自噬水平最高（P˂0

8、.05）。ox-LDL+APN组的巨噬细胞中LC3II表达水平较单独给予ox-LDL处理组明显降低，同时电镜结果也表明ox-LDL+APN组的巨噬细胞内自1首都医科大学硕士学位论文噬小体的形成较ox-LDL组有明显减少（P˂0.05）