mir-103_195_15b调控sall4抑制脑胶质瘤细胞增殖及侵袭作用的研究

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1、硕士学位论文miR-103/195/15b调控SALL4抑制脑胶质瘤细胞增殖及侵袭作用的研究MIR-103/195/15BINHIBITTHEPROLIFERATIONANDINVASIONONGLIOMABYREGULATINGSALL4张娜娜哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q71学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文miR-103/195/15b调控SALL4抑制脑胶质瘤细胞增殖及侵袭作用的研究硕士研究生：张娜娜导师：赫杰副教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：生命科学与技术学院答辩日

2、期：2015年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q71U.D.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceMIR-103/195/15BINHIBITTHEPROLIFERATIONANDINVASIONONGLIOMABYREGULATINGSALL4Candidate：NanaZhangSupervisor：AssociateProf.JieHeAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：Biology

3、Affiliation：SchoolofLifeScienceandTechnologyDateofDefence：June,2015Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要近年来的研究表明，miRNA通常在转录后水平来调控基因的表达，其在肿瘤组织中的异常表达与肿瘤的发生发展有至关重要的作用。在胶质瘤的研究中，miRNA与SALL4的调控关系的研究较少，具有相同“种子区”的多个目标miRNA共同调控SALL4也未见报道。为了探究miR-

4、103、miR-195和miR-15b的作用，我们采用MTT增殖实验发现miR-103、miR-195和miR-15b可以显著抑制脑胶质瘤细胞的增殖能力。为了探讨其抑制增殖的机制，我们采用PI/AnnexinV双染色流式细胞仪分析细胞凋亡，发现miR-103、miR-195和miR-15b可以诱导脑胶质瘤细胞的凋亡，且这3种miRNA存在竞争关系。同时，我们也采用Transwell细胞小室实验检测这3种miRNA对胶质瘤细胞迁移及侵袭能力的影响。结果显示，miR-103、miR-195和miR-15b可以在不同程度上抑制细胞的迁移和侵袭，并且

5、共同转染这3种miRNA的结果表明miR-103、miR-195和miR-15b存在竞争关系。我们用实时定量RT-PCR技术对miR-103、miR-195和miR-15b在脑胶质瘤组织样品中的表达情况进行了分析，结果表明60%以上的肿瘤组织样品中，这3种miRNA的表达水平显著降低，结合课题组前期SALL4在同种胶质瘤中的表达水平的检测结果，并通过SPSS软件进行相关性分析，表明miR-103、miR-195和miR-15b与SALL4具有显著的负相关性。经生物信息分析发现miR-103、miR-195和miR-15b都有以SALL4作为直

6、接靶基因的可能性，并且具有相同的种子序列。应用荧光素酶双报告系统、实时定量PCR、WesternBlot等进行鉴定，结果表明miR-103、miR-195、miR-15b竞争性抑制SALL4蛋白水平的表达，以此得到SALL4是miR-103、miR-195、miR-15b的直接靶基因的有效证据。综上所述，本论文研究结果表明，miR-103、miR-195和miR-15b竞争性抑制SALL4的表达，从而抑制脑胶质瘤细胞的增殖，迁移和侵袭能力。关键词：脑胶质瘤；侵袭；迁移；miRNA；SALL4-I-哈尔滨工业大学理学硕士学位论文Abstract

7、RecentstudieshaveindicatedthatmiRNAsplayavitalroleintumordevelopmentandusuallyregulatedgeneexpressionintheposttranscription.Inglioma,theresearchontherelationshipbetweenmiRNAsandSALL4andtheirmultipletargetswithsameseedregionhavennotreported.ToinvestigatethefunctionofmiR-103,

8、miR-195andmiR-15b,aseriesofexperimentswereperformed.OverexpressionofmiR-103,miR-19