苯巴比妥对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护及对脑组织中kcc2的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEf琵ctofPhenobarbitalontheneonatalratswithhypoxic-ischemicbraindamageandKCC2levelinthebrainBy：SupeiZhangSupervisor：Prof．QingduanWangProf．CongWangPharmacologySchoolofpharmaceuticalSciencesApril，2013学位论文

2、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：；芬蚕靠日期：劲f与年6月l。日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查

3、阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：{眩拳靠日期：如J，年G月，D日本研究由以下基金资助(1)高等学校博士学科点专项科研基金新教师类——编号：20104101120012(2)河南省高等学校青年骨干教师资助计划在此深表感谢!中文摘要摘要新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypox

4、ic．ischemicbraindamage，HIBD)是指围生期窒息所致缺氧缺血而出现的～系列临床脑病表现，是新生儿窒息后的严重并发症，常可引起不可逆的脑组织损伤和一系列中枢神经系统后遗症。尽管关于HIBD发病机制的学说众多，但是至今尚未予以完全阐明。目的：本实验旨在研究苯巴比妥干预对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HmD)的保护及对脑组织中KCC2的影响，并对苯巴比妥的脑损伤保护作用机制进行初步探讨。方法：7日龄SD大鼠，随机分成三组：假手术组、HIBD模型组、苯巴比妥组。HIBD模型组和苯巴比妥组参照Rice

5、．Vannucci方法制作新生大鼠HIBD模型(结扎左颈总动脉后，置于缺氧箱中通入8％氧氮混合气体2h)，假手术组仅游离左颈总动脉，不作缺氧缺血处理。缺氧缺血结束后苯巴比妥组即刻给予腹腔注射苯巴比妥负荷剂量25mg／kg，18h后给予剂量15mg／kg，2次／天，共3天。HIBD模型组给予等体积生理盐水。采用氯化2，3，5一三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride(TTC))染色方法检测脑组织梗死体积；通过自主活动及Morris水迷宫等实验观察苯巴比妥对HIBD新生大

6、鼠脑组织是否具有长期保护效应；此外，分别通过采用Real．timePCR、Western-blot及免疫组织化学技术检测KCC2mRNA、KCC2蛋白水平的表达情况。结果：(1)缺氧缺血实验结束2小时后，新生大鼠出现固定向左侧旋转的症状，是模型成功的行为学标志。(2)TTC染色结果也显示，缺氧缺血模型组动物脑组织有明显的梗死区域，再次验证了我们制备的缺氧缺血模型是成功的。与缺血对照组比较，苯巴比妥干预处理的缺氧缺血新生大鼠脑梗死体积比率明显低于HIBD模型组(p

7、新生大鼠自主活动较Sham组显著减少，苯巴比妥治疗组与Sham组比较自主运动次数无显著差异Q>o．05)。(41Morris水迷宫实验结果显示：对于平均逃逸潜伏期，HIBD组>苯巴比妥治疗组>假手术组，实验组之间的差异有显著性(P<0．05)；HIBD组在目标象限停留的时间百分比和穿越平台次数与苯巴比妥组、假手术组之间均有显著性差中文摘要异(P<0．05)。提示HIBD大鼠的学习记忆能力下降，苯巴比妥干预能明显增加HIBD大鼠的学习记忆能力(P

8、后显著下调，且KCC2蛋白表达降低明显出现在海马CAl区锥体神经元；苯巴比妥组与HmD组相比，KCC2mRNA及蛋白表达的下调有所减少，差异非常显著(p<0．01)。结论：(1)苯巴比妥能降低脑组织缺血侧梗死体积比率、增加HIBD大鼠的自主活动能力和空间学习记忆能力，表明苯巴比妥能减轻HIBD病理生理损伤过程，减轻新生大鼠HIBD早期和远期病理改变，从而对HIBD损伤有保护作用。(2)缺氧缺血后，新