肠淋巴液引流对失血性休克大鼠内质网应激应激的影响

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2、究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，，、文责自负。导师签名：彳名y韧I目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3英文缩写⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7研究论文肠淋巴液引流对失血性休克大鼠内质网应激的影响前言⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9日lJ舌⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．

3、．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35综述内质网应激与心肌缺血再灌注损伤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41致谢⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．52中文摘要肠淋巴液引流对失血性休克大鼠内质网

4、应激的影响摘要重症失血性休克引起机体组织器官的缺血、缺氧，进一步引起组织细胞的内质网应激(endoplasmicreticulumstress，ERS)，导致细胞结构损伤或凋亡，成为患者器官功能障碍、衰竭乃至死亡的重要因素。近年来研究表明，危重状态下的肠淋巴液回流至体循环成为远隔器官肺、肝、心、肾等重要器官损伤的重要原因；以肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流的手段阻断肠淋巴液回流均可减轻各组织器官的炎症反应、自由基损伤，改善能量代谢，对于重症休克的防治具有积极意义。但减少肠淋巴液回流减轻器官损伤的机制是否与降低组织细胞的内质网应激有关，尚不清楚。为此，

5、本研究采用失血性休克模型，观察休克肠淋巴液引流对休克大鼠肺、肝、肾、心肌组织细胞内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(glucose．regulatedprotein78，GRP78)、钙网蛋白(calreticulin，CRT)的影响，进一步观察对ERS引起细胞凋亡途径的启动分子C／EBP同源蛋白(C／EBPhomologousprotein，CHOP)、天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinylaspartatespecificproteinase12，Caspase一12)以及细胞凋亡的影响，探讨肠淋巴液引流对失血性休克大鼠组织细胞内质网

6、应激的作用。首先，18只Wistar雄性大鼠随机均分为：假手术组、休克组及休克肠淋巴液引流组(休克+71流组)。大鼠经戊巴比妥钠全身麻醉后，行股部手术，右股静脉注射肝素钠全身抗凝，右股动脉插管连接生物信号采集系统，连续监测平均动脉血压(menarterypressure，MAP)；左股侧动脉插管后连接注射器固定于抽注机上备放血用；腹部手术，剥离肠系膜淋巴管。待所有手术完成、稳定30min后，休克组、休克+引流组大鼠经左股动脉匀速放血，10min内将MAP降至40mmHg，复制失血性休克模型。维持低血压60min后，将放出的全血与林格氏液按1：1

7、混匀，经右侧股静脉输液复苏，30min完成；观察至输液结束后3h。休克+引流组在输液结束后，行肠淋巴管插管，按我室常规方法引流休中文摘要克肠淋巴液至休克3h。假手术组进行相同的手术操作，但不放血、不输液。休克组及休克+71流组大鼠在液体复苏后3h、假手术组于相应时间点，留取肺、肝、心肌、肾纠织，部分组织制备10％组织匀浆，ELISA法检测GI心78、CRT、CHOP、Caspase．12含量；部分组织制备单细胞悬液，应用流式细胞仪进行细胞周期分析，计算细胞增殖指数(proliferationindex，PI)；部分组织应用多聚甲醛固定，制备组织

8、切片，DAPI染色法检测各组织细胞的凋亡率。结果显示，休克组大鼠肺、肝、肾、心肌组织内质网应激标志分子GI冲78、CRT含量均显著高于假手术组；休克+