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《利用分子标记对桃_李_杏_梅_樱类植物系统发育的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、中国南方果树2003;32(3):45～50453利用分子标记对桃、李、杏、梅、樱类植物系统发育的分析[1,2]程中平(1中国科学院武汉植物研究所武汉430074;2湖北省武汉市林业果树研究所)提要采用RAPD技术,利用从200个10碱基随机引物中筛选的22个随机引物对桃、李、杏、梅、樱类植物中的223个试材进行了DNA扩增分析。结果表明:每个随机引物都能在桃、李、杏、梅、樱类植物的DNA扩增带中找到多态,但每类植物没有能区别其他类别的共有特征带。对22个随机引物180个位点上的RAPD带进行聚类分析,结合前人从形态学、细胞学、孢粉学和酶学的研究结果,认为桃、李、杏、梅、
2、樱类植物可划分为桃属、李属、杏属和樱属。关键词桃;李;杏;梅;樱;RAPD;系统发育桃、李、杏、梅、樱属蔷薇科核果类果树,在它们的分属上存在不同的意见。Benthamand[1][2]Hooker、许乃特氏(C.K.Schneider)和佩来氏(L.H.Bailey)将它们均划归为李属[3,4](PrunusL.),然后再分不同亚属;俞德浚则将它们分为李属、桃属、杏属、樱属。随着科学技术的进步,可以采用更多的方法从宏观到微观对于前人从形态学上的分类进一步进行研[5][6][7]究。魏文娜等、王业遴等、唐前瑞等通过细胞学、孢粉学、酶学对桃、李、杏、梅、樱的亲缘关系进行了研究
3、,并且分析了它们的演化顺序。近年发展起来的分子生物学技术,使人们从遗传物质DNA本身去揭示生物内在本质的东西成为可能。笔者运用从200个随机引物中筛选得到的22个10碱基随机引物对223个桃、李、杏、梅和樱类植物进行了RAPD分子标记,旨在为澄清他们的系统发育提供新的依据。1材料与方法1.1材料从中国农业科学院郑州果树研究所、江苏省农业科学院园艺研究所、北京市林业果树研究所及武汉市的一些地方采集供试材料(见表1)。对采集的样品,直接用鲜叶提取DNA,或放在7.2℃冰柜中贮存备用。[8]1.2方法DNA提取:取采集的各桃种质幼嫩叶1～2片,依照微量提取法提取DNA。PCR扩
4、增及电泳检测:应用筛选的22个引物(见表2)进行PCR扩增。扩增条件采用经优化的反应体系,PCR反应的总体积25μl,其中含10×PCR缓冲液2.5μl,MgCl2(25mmol·-1-1-1l)2.0μl,dNTP(2mmol·l)2.5μl,TaqDNA聚合酶(5U·μl)0.24μl,引物(16.5ng·-1-1μl)2.0μl,模板DNA(10ng·μl)5.0μl。引物购自上海生工生物工程公司,PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶、MgCl2和dNTP均购自上海普洛麦格生物产品有限公司。反应液混匀后,在其上加一薄层矿物油。PCR扩增仪为DNAThermalCycle
5、r480(thePerkin2ElmerCor2[9]poration,USA),PCR反应条件同史永忠等采用的参数。扩增完毕,在1.4%琼脂糖凝胶-1(西班牙产,加含EB0.5ug·ml)上电泳,以华美生物工程公司产LambdaDNA/EcoRI+TMHindⅢ和MBI(molecularbiologyproducts)产100bpDNALadderPlus(GeneRuler)作标记,在紫外透射仪上观察,照相。TM数据记录与统计:用GeneRuler100bpDNALadderPlus和LambdaDNA/EcoRI+HindⅢ3湖北省武汉市晨光计划项目(985003
6、074);华中农业大学国家作物改良重点实验室资助项目;中国科学院方向项目(KSCX22SW2320)。46中国南方果树第32卷表1供试品种材料Table1Varieties(cultirars)collectedfortheexperiment红叶李Hongyeli芙蓉李Furongli早黄李Zhaohuangli大石早生OishiPrunussalicinaP.salicinaP.salicinaP.salicina美人梅Meirenmei李Naili变绿萼Bianluer虎丘晚粉HuqiuwanfenP.salicina×P.salicinaAr.mumeAr.mum
7、eArmeniacemume山桃梅Shantaomei白须朱砂Baixuzhusha残雪Chanxue淡丰后DanfenghouAr.mume×AmygdalusAr.mumeAr.mumeAr.mume×Ar.vulgarisdavidiana实生杏SeedlingApricot红荷包Honghebao二花槽Erhuacao毛樱桃MaoyingtaoAr.vulgarisAr.vulgarisAr.vulgarisCerasustomentosa东塘樱桃Dongtangyingtao樱花Cheeryblossom雷尼尔Lei
