药物过量时激活pxr介导调控药物代谢酶与转运体转录促进毒物消除的解毒机制研究

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1、万方数据中图分类号墼垒UDC610博士学位论文学校代码10533药物过量时激活PXR介导调控药物代谢酶与转运体转录促进毒物消除的解毒机制研究Detoxificationmechanismofpromotionofdrugclearance’activationofPreg：XDyaatmnOIregnanereceptor-mediatedtranscriptionregulationoIdrug一一一●^_‘●一ltabolizinandtransporters。sRuationmetaboenzymesantransportersinsItUarionoI‘。drugoverdo

2、se作者姓名：戴立波学科专业：药学研究方向：临床药学学院(系、所)：中南大学药学院指导教师：李焕德教授答辩委员会主席中南大学2014年5月猢翻象学位论文原创性声明嬲必渊必万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：墼日期：坐』竺年—期堕日学位论文版权使用授权书

3、本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：新签名毖钐日期：础年』月手日万方数据药物过量时激活PXR介导调控药物代谢酶与转运体转录促进毒物消除的解毒机制研究摘要研究目的：1．基于“上调MDRl基因、诱导P．gP外向转运解除中枢抑制药物中毒”的机制研究，采用ATP酶活性测试法，考察待测药物对P．gpATP酶活性的影响，

4、明确药物是否为P．gp底物，初步建立临床中毒多发的中枢抑制药物P—gp底物谱，从而明确适合该中毒解救治疗方案的药物。2．采用药物跨膜双向转运法，考察待测中枢抑制药物在血脑屏障上的转运特性，并进一步确证P．gp是否参与这些药物在血脑屏障上的转运。3．考察在常规剂量与中毒剂量下，药物本身对大鼠肝脏、前额叶皮质与海马中PXR信号通路调控I相代谢酶CYP3A4和III相转运体P-gp的影响，并考察药物过量中毒情况下给予PXR激活剂对大鼠肝脏、前额叶皮质与海马中PXR、CYP3A4与P—gp的mRNA与蛋白表达水平的影响，从而揭示通过激活PXR信号通路调控药物代谢酶与转运体协同促进药物消除的分

5、子机制，以期为开辟新的药物中毒救治途径奠定基础，为研究新型解毒药物提供新的思路。研究方法：1．经文献调研，很多中枢抑制药物均为P—gp的底物或调节子。以建立中枢抑制药物P．gp底物谱为目标，制定研究药物的入选标准II万方数据并纳入待研究药物。建立ATP标准曲线后，以P．gPATP酶抑制剂四氧嘧啶作为阴性对照，以P．gPATPase诱导剂维拉帕米作为阳性对照，用多功能酶标仪检测高、中、低浓度的待测化合物的荧光强度，经数据处理后得到ARLUb拈。l与ARLUTc值并比较二者的大小，考察待测药物对P．gPATPase活性的影响。2．采用人脑微血管内皮细胞与人星形胶质细胞共培养的方式建立人血

6、脑屏障体外模型，并对模型特征进行评价，通过MTT法确定各药物对细胞的无毒浓度范围，建立并验证细胞转运液中各待测药物的定量分析方法，以P．gp荧光性探针底物Rh．123作为阳性对照，采用双向转运法考察入选的中枢抑制药物跨血脑屏障的转运特性，并考察P—gP抑制剂对药物跨血脑屏障转运的影响，进一步确证P—gp是否参与这些药物在血脑屏障上的转运。3．选择喹硫平为中毒的模型药物，选择SD大鼠为中毒模型动物，选择地塞米松为核受体PXR的诱导剂。SD大鼠随机分为4组，即空白组(Control组)，喹硫平常规剂量组(Normal组)，喹硫平中毒未干预组(Toxic组)，以及喹硫平中毒地塞米松干预组(

7、Toxic+Dex组)，按分组进行不同处理后，于预先设定的时间点采集大鼠的肝脏、前额叶皮质与海马，利用Real．timePCR与Western．blot分子生物学技术，考察不同时间点各组大鼠的肝脏、前额叶皮质与海马中核受体PXR、I相代谢酶CYP3A4、III相转运体P—gP的mRNA与蛋白表达水平，并对数据进行统计分析。研究结果：1．舒必利、齐拉西酮、西酞普兰组的RLU值均大于维拉帕米组，推测这3个药物对P—gp的亲和力比维拉帕米弱。舒必利、齐拉西酮、西