bufalin对人食管癌细胞erkp-erk和细胞迁移能力的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：衣矽今名导师签毒i舱级学院领导盖章：?，丸B年弓月M日，，，’河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中

2、不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：≥p令％引币煞琶。釜炳Ph，公导师签芬拶Z’阳／{年专月多曰目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4研究论文Bufalin对人食管癌细胞ERK／p．ERK和细胞迁移能力的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”7日IJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”／材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·21讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26综述Bufalin在肿瘤中的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··30致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·36个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37中文摘要BufaIin对人食管癌细胞ERK／p_E眯和细胞迁移能力的影响摘要食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其发生是多因素作用、多基因参与、多阶段共同发展的疾病，然而其发生发展的确切机制尚不明确。我国是世界上食管癌死亡率最高的国家之一，每年有不少人死于食管癌。由于其早期症状不明显，不易察觉，到确诊时已属中晚期，故预后较差。尽管近些年来通过普查使得食管癌早发现早诊断早治疗的水平有所提高，食管癌的预后有所改善，但五年生存率仍较低。因此，继续寻找新的抗肿瘤药

5、物，并了解其在肿瘤发生发展过程中作用的信号转导通路成为食管癌临床治疗研究的重点。本实验主要研究了ERK信号转导通路，即Ras．Raf-MEK-ERK三级酶促级联反应，并通过转染高活性MEK质粒来研究食管癌细胞中ERK／p—ERK及细胞迁移能力的变化，进而得知高活性MEK质粒对人食管癌细胞中ERK信号通路的生物学作用，通过使用Bufalin(即蟾蜍灵，是从中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物提取的主要活性成分之一，属于一种强心苷类物质，己被用来作为一种传统的中医治疗感染、肿瘤以及麻醉)来有效的阻断通路信号的异常传导，降低各个因子的活化水平，从而达到抑

6、制肿瘤因子异常增殖和迁移的作用。Bufalin在临床上多有报道，但尚未应用于食管癌的治疗，本实验室的前期实验证实，Bufalin可通过ERK信号转导通路来下调细胞内p-Raf,P．MEK、P．ERK的水平，而Raf,MEK、ERK则无明显变化，提示Bufalin可能通过抑制ERK通路中各个因子的活化达到抑制食管癌发生发展的作用。本实验就此在Bufalin对人食管癌细胞中ERK／p．ERK和细胞迁移能力的影响方面进行研究，从而多方面验证Bufalin在食管癌中的作用，为临床能够更好的治疗食管癌提供可靠的实验依据与新的治疗方向。为了更好的研究食管癌发生发展的具体机

7、制以及治疗食管癌的方案，本实验继续使用了食管癌细胞株TEl3进行人体外的研究，旨为了解在食管癌发生发展过程中Bufalin在ERK通路中所发挥的具体作用，并为更好的服务于临床打下坚实的基础。中文摘要目的：探讨Bufalin对人食管癌细胞ERK／p—ERK和细胞迁移能力的影响方法：1将携带高活性MEK基因的质粒转化至DH5a大肠杆菌中进行扩增，并使用脂质体法将携带高活性MEK基因的质粒成功转染到食管癌TEl3细胞中，使用WesternBlot方法分别检测转染质粒Oh、24h、30h、36h、42h、48h后细胞内ERK表达及其活化情况的变化，并得出转染的最佳时间

8、。2用WesternBlot方法分别检