农杆菌介导floral—dip转基因方法研究进展

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1、维普资讯http://www.cqvip.com2006年9月中国油料作物学报2006，2Z(3)：362—367Chinesejournalofoilcropsciences农杆菌介导floral—dip转基因方法研究进展韦献雅，付绍红，牛应泽h(1．四川农业大学油菜研究中心，四川雅安625014；2．成都市第二农业科学研究所，国家油菜改良四川成都分中心，四川成都611130)摘要：农杆菌介导的floral—dip转基因方法是近年发展起来的一种简便、快速、高效、重复性好、稳定性高的非组织培养转基因方法。介绍了该方法的发展、转化原理、转化条

2、件、后代遗传学分析，并讨论了其存在的问题，展望了其在基因工程中的应用前景。关键词：农杆菌介导；floral—dip；基因转化中图分类号：Q943．2文献标志码：A文章编号：1007-9084(2006)03—0362—06农杆菌介导的floral—dip转化方法是近年发展大。floral—dip法转化过程中加入SilwetL一77与未起来的一种简便、快速、高效、重复性好、稳定性高的加入SilwetL一77的处理相比，转化效率差别很大。非组织培养转基因方法，主要运用于拟南芥T—研究还发现，用该法转化拟南芥时，农杆菌液体培养DNA或转座子插入突

3、变体库的构建和功能基因组基中除加入SilwetL一77外，只需再加入蔗糖即可达研究¨。其最大的优点在于能直接获得转化的种到较好的转化效果。另外，转化操作时拟南芥的发子，避开了组织培养和继代培养，排除了组织培养中育阶段对转化效率影响也很大，一般以开花前5～因体细胞变异，给目的基因的正确表达及分子遗传10d为宜。学研究带来的极为不利的遗传背景，同时为一些不在继Clough应用floral—dip法转化拟南芥获易建立遗传再生体系的作物类型提供了基因转移的得成功后，近几年也有不少学者应用floral—dip法新途径。Floral—dip转化方法现已

4、成功应用于拟南转基因，但成功的例子较少。目前仅在拟南芥、萝芥。、萝卜【引、莒蓿、油菜等植物中。本文根卜、油菜及莒蓿上有成功的报道。据目前所能查阅到的资料，对农杆菌介导的floral—Curtis采用floral—dip法对萝卜(Raphanusdip转化方法的机理和目前的研究进展作简要概述。sat~usL．var．1ongiplnnatusBailey)转化获得了成功。他们在比较了植物发育的不同时期对转化效率l农杆菌介导的floral—dip转基因方的影响后发现，主花序的转化效率最高；在Pluron．法的提出及发展icF一68、Tween2

5、0及SilwetL一77等3种表面活性Clough[4把真空渗透转化法(vacuuminfiltra—物质中，SilwetL一77的效果最好。徐光硕等用intion，Bechtold)演变成为更简便的农杆菌介导no——planta法处理5个甘蓝型油菜品种，获得了抗卡ral—dip转基因方法，该法只需将农杆菌菌液与植那霉素经PCR检测的阳性植株，平均转化效率为株的花接触而不需要进行真空处理。所不同的是，0．1％左右，且各甘蓝型油菜品种问的转化率无明显在菌液中加入一种表面活性剂物质SilwetL一77差异。付绍红等用floral—dip法处理甘

6、蓝型油(OSiSpecialties，Incl，Danbury，CT，USA)，并首次应菜，主要是研究表面活性剂SilwetL一77对floral—用该法转化拟南芥获得成功。同时Clough对影响dip转化甘蓝型油菜效果的影响，获得了103株抗卡floral—dip转化的三个主要因素(植株生长状态、蔗那霉素(Km)的抗性植株，认为0．05％的表面活性糖和表面活性剂)做了比较系统的研究。他们把真剂SilwetL一77对floral—dip转化甘蓝型油菜最为空渗透法与floral—dip法作了对比，发现在菌液中有利。加入SilwetL一77后，

7、抽真空对：于转化效率影响不目前拟南芥功能基因组的研究多以该法获得突收稿日期：2005—10—．25基金项目：四川省科技厅应用基础研究项目(04JY029)作者简介：韦献雅(1980一)，女，广西南宁人，I~lJJl农业大学在读硕士研究生，从事油菜转基因研究。·通讯作者：nyz@8{．Oalt1．edu．cno维普资讯http://www.cqvip.com韦献雅等：农杆菌介导floral—dip转基因方法研究进展363变体：Lawrence⋯在用反义RNA(RNAi)研究多倍体生～条T—DNA单链(T一链)，T一链5’末端与一作物中冗余基因

8、对基因组的作用时为获得突变体实分子VirD2结合，其余部分与VirE2结合，组成T一验材料，用floral—dip法转化模式植物拟南芥也获复合体。T一复合体被转移到农杆菌外，通过