ca2+cancb1-bakt在缺血及药物预处理中的作用研究

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1、中图分类号密级Ca2+／CaN／Cbl．b／Akt在缺血及药物预处理中的作用研究TheeffectsandmechanismofCa2+／CaN／Cbl．b／Aktintheoxygen—glucosedeprivationandpharmacologicalpreconditioning计：学位论文：86页表格：6个插图：15幅张微指导教师：尹琳教授申请学位级别：博士学位学科(专业)：内科学培养单位：大连医科大学附属第二医院完成时问：ZO--__---年四月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的

2、研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：i基f垫签字日期：兰!!年皇月』日关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、

3、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：作者签名：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。弛歹趁剔币签名：刀九，L导师签名扩／“k日期：如f3年年月f6日日期：dotS'年p月，6日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分泛素连接酶Cbl—b参与缺血预处理对P13K／Akt通路的

4、调控(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8(一)日U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．1细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．2试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．3仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1PC12细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．2氧糖剥夺⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11

5、2．3氧糖剥夺预处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··112．4MTT检测细胞存活率⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．5Hoechst33258细胞核染色检测凋亡细胞⋯⋯⋯⋯l12．6RealtimePCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．7蛋白质免疫印迹(Westernblot)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．8统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．预处理防止OGD诱导的细胞死亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．Cbl．b参与0GD预处理过程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．Cbl．b对OGD预处

6、理的反应大于Akt的激活⋯⋯⋯244．OGD预处理过程中Akt活性调节GSK3B磷酸化⋯⋯⋯265．Akt活性在OGD预处理过程中调控细胞的凋亡⋯⋯⋯28(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34第二部分Ca2+／CaN参与缺血预处理对Cbl—b的调控(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37(一)日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯371．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381．1细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381．2试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯382．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯382．1PCI2细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯382．2氧糖剥夺⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯392．3氧糖剥夺预处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯392，4MTT检测细胞存活率⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯392．5蛋白质免疫印迹(WesternBlot)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯··401．OGD缺血预处理降低缺血导致CaN表达的增加⋯⋯⋯402．不同时间点CaN与Cbl—b的对应表达⋯⋯