预适应联合后适应对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及机制研究

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1、万方数据中图分类号VDCR651．1610博士学位论文学校代码10533密级公珏预适应联合后适应对大鼠脑缺8／再灌注损伤保护作用及机制研究Theprotectiveeffectsandrelatedmechanismsofcombinedtreatmentwithpreconditioningandpostconditionint兰cerebral‘schemia／re，erfi"postconditioning0ncereralisctlemla／repertuslon●·lnrats一_作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：姜维喜临床医学神经外科湘雅医院袁贤瑞教授

2、中南大学2013年12月万方数据学位论文原创性声明UlIIIIIIIIIIIIIIIIIlUIY2688481本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。⋯雄蹴麴年瑚笋目学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向

3、国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版：本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。⋯距日期：越墨年厦月卫日聊签迸／／嘶日期：丝年型月乒日万方数据预适应联合后适应对大鼠脑缺血／再灌注损伤保护作用及机制研究摘要目的：观察缺血预适应、缺血后适应以及两者联合应用对大鼠脑缺血／再灌注损伤的保护作用，对大鼠脑缺血／再灌注损伤后缺血脑组织中HSP70蛋白、不同亚型HSP70基因表达以及磷脂酰肌醇．3．激酶／Akt(P13K／Akt)、细胞外信号调节激酶1／2(ERK

4、l／2)信号通路活性的影响。方法：120只SD大鼠随机分为5组：假手术组、脑缺血／再灌注损伤模型组、预适应组、后适应组以及预适应+后适应组。除假手术组大鼠外，其余各组均用线栓法闭塞大脑中动脉120min后再灌注48h，制作脑缺血／再灌注损伤模型；预适应在造模24和1h前采用3个循环的缺血15s／再灌注30s的方法诱导；后适应于再灌注前采用3个循环的再灌注30s／缺血15S的方法诱导。再灌注48h后，分别检测大鼠神经功能、脑梗死灶体积、脑组织氧化应激损伤生化指标以及神经元凋亡情况。50只大鼠随机分为5组，再灌注48h后，分别用法免疫组化检测HSP70蛋白的表达；用Real．timePCR

5、检测HSPA8、删以及HSPAl2B基因表达；用WesternBlot检测磷酸化Akt(p．Akt)和磷酸化ERKl／2(p-ERKl／2)蛋白表达。结果：与模型组比较，预适应与后适应均能明显改善大鼠脑缺血／再灌注损伤后的神经功能和减少脑梗死灶体积，两者保护作用强II万方数据度相似，无明显差异，预适应联合后适应改善大鼠脑缺血／再灌注损伤后的神经功能和减少脑梗死灶体积的作用明显强于单独的预适应或后适应。脑缺血／再灌注后，大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性降低和丙二醛(MDA)含量增高，预适应略有升高SOD活性和降低MDA含量的作用，而后适应能显著升高脑组织中SOD活性和降低MDA含量

6、，预适应联合后适应后，升高脑组织SOD活性、降低MDA含量的作用进一步增加，明显强于单独的预适应或后适应。与模型组比较，预适应和后适应均能减少缺血区脑组织的神经细胞凋亡数量，而后适应减少神经细胞凋亡数量的作用强于预适应，两者联合应用较少脑缺血／再灌注损伤后神经元凋亡的作用增强。假手术组脑组织HSP70呈微量表达，与假手术组比较，脑缺血／再灌注损伤模型组脑组织HSP70呈轻度表达，而预适应和后适应组HSP70阳性细胞明显增多，呈中度表达，预适应+后适应组可见大量HSP70阳性细胞，呈高度表达。大鼠脑缺血／再灌注后，缺血侧皮质、皮质下和海马组织中删8、HSPAlA及HSPAl2B3个基因的

7、表达量均略微升高，两处升高的模式相似。单独预适应或后适应均能够显著升高HSPA8、HSPAlA及HSPAl2B基因的表达量，其中HSPAIA的表达量则在预适应时升高明显，而HSPA8mRNA在后适应时表达最高，HSPAl2B的表达量两者无明显差异：将预适应联合后适应，上述3个基因的表达量均较单独采用预适应或后适应时显著增高。WesternBlot检测p-Akt和P．ERKl／2结果显示：与对照组比较，脑缺血／再灌注后p-Akt和P．ERKl／2