氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡的干预作用及其机制研究

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1、分类号：R3单位代码：10343学号：151006840硕士学位论文论文题目:氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡的干预作用及其机制研究研究生姓名：李银苹学科专业：病理学与病理生理学类型：学术型指导教师：金可可二O一八年五月论文题目:氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡的干预作用及机制研究答辩委员会主席：章卫平教授答辩委员会成员：徐正衸教授薛战雄主任医师论文答辩日期2018年5月18日温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要………………………………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………………………

2、………4前言………………………………………………………………………………………6仪器与材料……………………………………………………………………………………7实验方法……………………………………………………………………………………9实验结果……………………………………………………………………………………21分析与讨论…………………………………………………………………………………30附录…………………………………………………………………………………………37致谢…………………………………………………………………………………………38综述及参考文献………………

3、…………………………………………………………39学位论文独创性声明……………………………………………………………………631温州医科大学硕士学位论文氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡的干预作用及其机制研究中文摘要目的：自从2007年发现H2具有选择性抗氧化特性以来，已陆续发现氢分子在动脉粥样硬化、代谢综合征和缺血-再灌注损伤等多种疾病过程中发挥选择性抗氧化作用，但氢分子对糖尿病肾病的保护作用尚未见报道，本研究将从氧化应激的角度阐明氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡的干预作用及其可能存在的机制，为氢分子防止糖尿病肾病提供坚实的理论和实验基础。方法：用D

4、MEM（低糖，5.5mmol/L葡萄糖）培养基（包含10%FBS，100U/mL链霉素，100U/mL青霉素）培养小鼠肾小球系膜细胞，待细胞生长至亚汇合时，用不含胎牛血清（FBS）的低糖DMEM培养基饥饿24h，本实验分为4组：正常对照组（C组，5.5mmol/L葡萄糖）、甘露醇组（M组，5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇）、高糖组（HG组，25mmol/L葡萄糖）、（高糖+富氢水）组（HG+H组，25mmol/L葡萄糖+富氢水），造模48h。采用Westernblot法检测Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3、核因子-

5、E2相关因-2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO-1）的蛋白表达水平；RT-PCR检测HO-1和NQO-1的mRNA表达。超氧化物阴离子荧光探针（DHE）检测细胞内活性氧（ROS）水平，比色法检测细胞脂质过氧化（MDA）含量，总超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（WST-8）法检测SOD活性。结果：与正常组比较，高糖组Bax、cleavedcaspase-3的蛋白水平增加，Bcl-2蛋白表达减少（均P<0.05），而（高糖+富氢水）组上述蛋白与正常组的差异均无统计学意义（P>0.05）；与高糖组比较，（高糖+富氢水）组

6、的Bax、cleavedcaspase-3蛋白下调，Bcl-2蛋白上调（均P<0.05）。高糖组细胞内的ROS水平和MDA含量较正常组均明显增高（均P<0.05），（高糖+富氢水）组细胞内的ROS水平和MDA含量较高糖组均明显降低（均P<0.05）；高糖组SOD活性较正常组明显降低（P<0.05），（高糖+富氢水）组SOD活性明显高于高糖组（P<0.05），且（高糖+富氢水）组的SOD活性与正常组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与正常组比较，高糖组的Nrf2蛋白、HO-1和NQO-1蛋白及mRNA表达均减少（均P<0.05）；（高糖+富氢水）组的N

7、rf2、HO-1和NQO-1蛋白以及HO-1、NQO-1的mRNA表达均明显高于高糖组（均P<0.05）。2温州医科大学硕士学位论文结论：氢分子可抑制高糖状态下肾小球系膜细胞促凋亡蛋白的表达，同时诱导其抗凋亡蛋白的表达，其机制可能与激活Nrf2信号通路，发挥内源性抗氧化反应有关。关键词：氢分子；肾小球系膜细胞；凋亡；氧化应激；Nrf2信号通路3温州医科大学硕士学位论文InterventionofMolecularHydrogenonGlomerularMesangialCellApoptosisCulturedinHighGlucoseanditsMec

8、hanismAbstractObject:Sincemolecularhydro