水稻osafc2基因的功能分析

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1、密级:论文编号:中囯农业科学院、、/^立论文水稻基因的功能分析FunctionalAnalysisofOsAFC2inRice(OryzasativaL.)硕士研究生：梁蒙指导教师：王嘉研究员申请学位类别：理学硕士专业：生物化学与分子生物学研究方向：植物分子生物学与基因工程培养单位：生物技术研究所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所M交的论文足我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不to含其他人a经没表或撰写过的研究成粜，也不乜含为获得中w农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我-mx作

2、的M志对本研究所做的仟何m献均a在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:#vl时间：彳^少年yjJ/j关于论文使用授权的声明本人完全了解中M农业科学院苻关保留、使用学位论文的规定，即：中丨11农业科学院苻权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被査阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、fr:编学位论文。同意中国农业科学院可以阳不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究牛:签名緣时间：■年导师签名:时n:年中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题回水稻0MFC2魅因的功能分析植物分子生物论文作者梁蒙

3、专业生.物化学与研究方

4、向学与基因工程指导教师：rap*.培养单位（研究所）生物技术研究所姓名职称硕（博）单位专业签名评硕导口上海师范大学生命科生物化学与董彦君教授傅导0学学院分子生物学阅副研究硕导0中国农业科学院饲料生物化学与人杨培龙rr»分子生物学.贝博导口科学研究所%辩硕导口中W科学院植物研究生物化学与主漆小泉研究员博导0分子生物学4^表所席硕导口中国农业大学生命科生物化学与于静娟教授博导0学学院分子生物学硕导口中国科学院遗传与发生物化学与王国栋研究员博导0育生物学研究所分子生物学H-.1硕导口中国农业科学院生物生物化学与赵军研究员博导0技术研究所分子生物学辩硕导〇中国农业科学院4-:物生

5、物化$4郎志宏研究员博导0技术研究所分子生物学Ip錢金硕异口博导□贝硕异口博导口硕导口博导口会议记录（秘书）张兰论文答辩时M地点2015年5月27闩重大楼416会议室密级:论文编号:中国农业科学院学位论文水稻OsAFC2基因的功能分析FunctionalAnalysisofOsAFC2inRice（OryzasativaL.）硕士研究生：梁蒙指导教师：王磊研究员申请学位类别：理学硕士专业：生物化学与分子生物学研究方向：植物分子生物学与基因工程培养单位：生物技术研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSci

6、encesMasterDissertationFunctionalAnalysisofOsAFC2inRice（OryzasativaL.）M.S.Candidate：MengLiangSupervisor：Dr.LeiWangMajor：BiochemistryandMolecularBiologySpecialty:PlantMolecularBiologyandGeneticEngineeringMay2015摘要水稻是重要的粮食作物，同时也是基因组研究的模式植物。真核生物的基因大多是由外显子与内含子相间组成的断裂基因，且其正常表达伴随着mRNA的精确剪接，继而翻译

7、成功能不同的蛋白质发挥作用。拟南芥中AtAFC2可以和几种SR蛋白相互作用，SR蛋白会对下游可变剪切体产生影响，从而影响mRNA的可变剪切。然而在水稻基因研究中，关于调控mRNA可变剪切相关的报道较少，因此本研究克隆了水稻OsAFC2并对其功能进行了初步的探究。1)通过对水稻RNAi突变体库的筛选，获得了OsAFC2基因沉默的突变体植株；克隆OsAFC2基因，通过生物信息学对其分析，发现水稻OsAFC2基因与拟南芥中AtAFC2基因相似度较高，OsAFC2与AtAFC2蛋白序列一致性为70.05%；2)亚细胞定位实验表明，OsAFC2定位于细胞核内，表明OsAFC2在细胞

8、核内发挥功能；3)实时定量PCR结果表明OsAFC2在水稻的各个组织部位均有表达，其中在叶片中表达量最高，茎中表达量最低；4)构建OsAFC2的沉默和过表达载体，转化日本晴得到转基因株系。通过链特异性转录组数据分析发现，在RNAi转基因植株中检测到的特有可变剪切比对照增加了50.01%，过表达植株中可变剪切的数量也有所增加，说明水稻中OsAFC2基因正常水平的表达，能够稳定的调控下游SR蛋白以及可变剪切辅助因子，这与拟南芥中AtAFC2基因相似，沉默或过表达，都会扰乱SR蛋白磷酸化水平，影响下游可变剪切辅助因子间的相互作用，导