莲藕酵母双杂交cdna文库及ppo基因诱饵载体构建

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1、分类号：0789学校代码：10712UDC：581.1研究生学号：2013051644密级：公开@*灶农林贵祆大学2015届全日制硕士专业学位研究生学位论文莲藕酵母双杂交cDNA文库及基因诱饵载体构建类型中药学硕士领域、方向药用植物资源保护与利用研究生_________王静___________指导教师郭宏波副教授完成时间________2015年5月中国陕西杨凌研究生学位论文的独创性声明本人声明：所呈交的全日制硕士专业学位论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数椐及

2、结杲的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结杲，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年S月日导师指导研究生学位论文的承诺本人承诺：我的全日制硕士专业学位研究生—...瑪_所呈交的硕士

3、学位论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我现岗职务工作的结杲，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研冗结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。关于研究生学位论文使用授权的说明本学位论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位论文的全部或部分内容

4、授权汇编录入《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位论文及其相关的工作成果时，将以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人(包括研咒生本人)未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保

5、密的学位论文在保密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）Classificationcode:Q789Universitycode:10712UDC:581.1Postgraduatenumber:2013051644Confidentialitylevel:PubicThesisforMaster’sDegreeNorthwestA＆FUniversityin2015CONSTRUCTIONOFYEASTTWO-HYBRIDSYSTEMCDNALIBRARYAND

6、POLYPHENOLOXIDASEGENEBAITVECTORINLOTUSMajor:TraditionalChineseMedicineResearchfield:TheProtectionandUtilizationofMedicinalPlantsResourceNameofPostgraduate:JingWangAdviser:HongBoGuoDateofsubmission:May2015YanglingShanxiChina莲藕酵母双杂交cDNA文库及PPO基因诱饵载体构建摘要莲藕(

7、Nelumbonucifera)，属莲科多年生水生草本植物，具有降脂降压、减缓氧化、防治脂肪肝等药理作用，是一种药食同源的食品。近年来国内外对莲藕需求日益增多，但莲藕在贮藏保鲜和加工过程中存在褐变问题，导致其商品性及营养价值的下降，严重影响了莲藕的出口创汇及医疗效果。研究发现多酚氧化酶（PPO）参与色素的形成过程，是导致莲藕褐变的关键酶之一，也在莲藕抵抗病虫害等过程中发挥了重要的作用。但是目前对PPO的研究主要集中在理化特性方面，有关其基因功能和机理机制的研究还很少。因此，本实验以莲藕为材料，在前人基

8、础上对多酚氧化酶基因进行进一步分子研究，对莲藕酵母文库及PPO基因诱饵载体进行构建，为后续运用酵母双杂交技术揭示莲藕多酚氧化酶的互作蛋白及顺式作用元件奠定基础，以期可以从根源上解决莲藕褐变问题并减少由此产生的经济损失，同时为增强植株抗逆性研究打下基础。通过本研究得到以下结果：1.采用CTAB-LiCl法提取莲藕芽尖总RNA，反转录合成cDNA第一条链并以其为模板进行PCR扩增、胶回收、连接转化、测序等试验得到含有酶切位点NdeI和EcoRI的PPO基因。