枯草芽孢杆菌溶栓酶的分离纯化及性质研究

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1、Ｉ雜相料义幸ｏｃｅａｎｒＭ＼ＩＲＳＩＴＹｏｆＣＨＩＮＡ±学位论文Ｉ硕ＭＡＳＴＥＲＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＩＩｓｏｌａｔｎｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄ＆ａｒａｃｔｅｒｚａｔｉｏｎｆｉｏｕｉｏ，ｐ英文题目：ｆｉｂｒｉｎｏｌｔｉｃｅｎｚｙｍｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ＞作者：张守禄指导教师：刘万烦教授、刘伟治教授学位类别：全曰制专业学位专业名称：生物工程研究方向：敌工程巧草芽巧杆菌溶栓酪的分离纯化及性质

2、研究＾谨；（此论文献给敬爱的刘万顺老师、、！韩宝拜老师刘伟治老师，我的父母、亲人和所有关心帮助过我的好友、同学张守禄Ｉ巧草巧菌落巧醋的分离巧化及性质研究枯草杆菌溶栓酶的分离纯化及性质研究如１＾广义答辩：．Ｉ煤之口学化论［ｊ．、巧４教帅铭字：訂云。恃答辩委貝舍化巧答字：赛參受；巧草杆菌落巧巧的分离巧化及性质研究独创黄明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进斤的研究工作及取得的研究成果，，。据我所知除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果

3、，也不包含未获得（注＝如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：弁＆年全月＾＾曰＾＾？；＾＾学位论文版巧使用授枚书本学位论文作者完全了解学校有关保留，并同意Ｗ下、使用学位论文的规定事项：１国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许、学校有权巧留并向论文被查阅和借阅。２，、学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索可＂采用影印、缩印或扫描等复制

4、手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中＂国学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。）（保密的学位论文在解密后适用本授权书：学位论文作者签名；导师签字签字一月从日日期义年月円签字日期；年Ｓ枯草芽跑巧巧巧栓南的分离巧化及巧质巧究枯草芽拖杆菌溶栓酶的分离纯化及性质研究摘要血栓类疾病是威胁人类生命健康的头号杀手。血栓形成后会对脑、也脏、肺等血液循环系统造成栓塞，从而导致多种疾病，如冠也病、脑血栓、动

5、脉硬化等。血栓性疾病由于其致残、致死率非常髙，所直是医学领域研究的重点和难点。血栓性疾病的发病与年龄相关，随着我国老龄化问题的曰益严重，血栓类疾病的预防和治疗显得尤为重要。一溶拴是血拴类疾病最有效、应用最广的治疗与预防方法么。通过溶栓药物的应用Ｗ达到溶解治疗血栓的目的。目前临床上应用的主要溶栓药物有尿激酪Ｋ－ＰＡ）（Ｕ）、链激酶（ＳＫ）和组织型巧洛巧原激活剂（ｔ等。这些溶栓药物虽然溶栓效果明显，、但依然存在半衰期较短价格昂贵等缺点，所Ｗ仍需要寻找疗效好。微生物、安全、经济的溶栓药物。溶栓巧广泛来源于动物、

6、植物和微生物一、，作为溶栓酶药物的来源，具有培养容易产星髙、所需设备简单等优点直都是洛栓药物研究开发的一个重点。本研究在实验室前期工作的基础上，对枯草芽巧杆菌发酵液中的溶栓巧进行。分离纯化建立了硫酸较盐析、离子交换层析的纯化方法，制备了较纯的枯草芽抱杆茜溶栓巧。研究了巧的稳定性及降解特异性。在此基础上，初步研究该巧在。动物体内的溶栓活性研究结果如下：１：．纯酶样品的制备将发酵巧用６０％饱和度的硫酸钱进行盐析，离也收集蛋白沉淀，溶解后，在醋酸盐缓冲巧（０．０２ＭｐＨ５．６）中透析。样品透析后经阳离一子交换层

7、析－ｓｔｏｗ（ＣＭｓｅｈａｒｏｓｅＦａＦｌ）进行进步分离纯化，制得纯化巧制品。ｐ－）通过蛋白质电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ和庚活检测，评价与检测纯化过程中溶栓巧组分的纯度及活性。’２．稳定巧及巧解特异性研究：在不同湿度（４ｒ、巧Ｃ）下，研究该巧在洛’液状态下的稳定性。结果发现，在４Ｃ条件下，庚活在９天的巧解实验中保留了９０％的活巧。而在３７ｒ条件下，，在９天巧解实验中，其巧活在前３天迅速下降’５天后基本没有检测到巧活。说明该巧在４Ｃ条件下具有较好的稳定性。此外，＂＂通过纤维蛋白平板实验。加热，发现该巧具有直接降解

8、纤维蛋白的能力巧章芽巧杆菌溶栓巧的分离巧化及性巧研究：初步的体内溶栓研究表明３，该酶在体内具有较．体内溶栓活性的初步研究强的溶栓效果。该酶通过股静脉注射４０分钟后．取实验