sox2与wntβ-catenin信号通路对结直肠癌sw620细胞株上皮间质转化的作用

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1、中图分类号：R363.2+1论文编号：HBLG2015-085UDC：密级：公开硕士学位论文SOX2与Wnt/β-catenin信号通路对结直肠癌SW620细胞株上皮间质转化的作用作者姓名：郭志娟学科名称：基础医学研究方向：肿瘤分子病理学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月26日申请学位类别：医学硕士导师姓名：宋旭东教授单位：华北理工大学基础医学院论文评阅人：匿名单位：匿名单位：论文答辩日期：2015年6月7日答辩委员会主席：张祥宏教授关键词：结直肠癌；SOX2；EMT；Wnt/β-catenin信号通路唐山华北理工大学

2、2015年6月SOX2andWnt/β-cateninSignalingPathwayonEpithelialMesenchymalTransformationofColorectalCancerCellLinesSW620DissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyGuoZhijuan(PathologyandPathop

3、hysiology)Supervisor:ProfessorSongXudongJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：2015年6月10日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已

4、获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：√□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：2015年6月10日签字日期：2015年6月10日摘要目的通过慢病毒介导的基因干涉技术沉默结直肠癌细胞株SW620中SOX2mRNA的表达，探讨SOX2、Wnt/β-catenin信号通路在结直肠癌细胞EMT发生、发展过程中的作用机理和相互间的关系。方法采用包

5、装好的慢病毒颗粒转染SW620癌细胞后筛选耐药菌株进行扩大培养，倒置相差显微镜下分别观察基因干涉组及阴性对照组细胞的细胞形态变化及划痕实验中的细胞迁移能力，应用RT-PCR和WesternBlot方法分别检测两组细胞中SOX2、β-catenin、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白质的表达。结果1细胞形态学观察：与阴性对照组相比较，基因干扰组SW620癌细胞的形状由长梭形向圆形、卵圆形过渡，细胞伪足伸出减少或者消失，细胞间距减小、密度增加。2划痕实验：与阴性对照组细胞比较，基因干扰组细胞的运动能力减弱，迁移至划痕中央处的细

6、胞少。3RT-PCR：基因干扰组SOX2、β-catenin和VimentinmRNA的相对表达量分别为0.25±0.04、0.20±0.03、0.19±0.03，上述三种因子的相对表达量明显低于对照组的相对表达量0.72±0.06、0.71±0.05、0.65±0.05，而E-cadherinmRNA的相对表达量为0.87±0.04，表达明显高于对照组的相对表达量0.31±0.04，差异具有统计学意义（P＜0.05）。对四种因子的mRNA的表达情况进行相关性分析，结果显示：SOX2mRNA和β-cateninmRNA表达呈正相关（R＝0.9

7、10，P＝0.012），SOX2mRNA和VimentinmRNA表达呈正相关（R＝0.829，P＝0.042），SOX2mRNA和E-cadherinmRNA表达呈负相关（R＝-0.841，P＝0.036），β-cateninmRNA和VimentinmRNA表达呈正相关(R＝0.886，P＝0.019)，β-cateninmRNA与E-cadherinmRNA表达呈负相关(R＝-0.899，P＝0.015)。4Westenblot：基因干扰组SOX2蛋白、β-catenin蛋白和Vimentin蛋白的相对表达量分别为0.33±0.02、0

8、.18±0.02、0.29±0.02，三种因子的相对表达量相对于对照组三种因子的相对表达量0.68±0.06、0.70±0.04、0.65±0.04均明显降低，E-