《HPLC仪使用要点》PPT课件

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1、HPLC仪使用要点主讲人唐辉石河子大学药学院2021/7/251HPLC的环境设置：HPLC的日常操作条件：温度：10～30℃；相对湿度<80％；最好是恒温、恒湿，远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施。2HPLC用水来源：1专门的纯水机或超纯水机；2去离子水重蒸；3二次或三次重蒸水；4采用类似家用的纯水机；5市场上瓶装的纯净水或蒸馏水；6其它途径；不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质越高放置时间越短。理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22μm的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及

2、空气等。3HPLC六通阀进样器的使用及保养六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出；将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。4六通阀进样器虽结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等

3、特点，但正确使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。HPLC六通阀进样器的使用及保养5六通阀进样器的进样方式有

4、部分装液法和完全装液法。使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75％，如20μl的定量环最多进样15μl的样品，并且要求每次进样体积准确、相同；使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20μl的定量环最少进样60至100μl的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100μl的平头进样针配合20μl满环进样。可根据进样体积的需要自已制作定量环，一般不要求精确计算定量环的体积，譬如，一根名义上10μl的定量环，实际是9μl还是1lμl并不重要，因

5、为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。六通阀进样方式6进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用0.45μm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。进样样品要求7泵的保养用流动相要清洁，过滤流动相和溶剂；用高质量试剂和HPLC级溶剂；进液处的砂芯过滤头要经常清洗；

6、流动相交换时要防止沉淀；定期更换垫圈，需要时加润滑油脱气，避免泵内堵塞或有气泡；每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中，从泵中洗去缓冲液。8柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；要注意流动相的脱气；避免使用高粘度的溶剂作为流动相；进样样品要提纯；严格控制进样量；每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。柱的保养9紫外灯的保

7、养在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。样品池要保养。2021/7/2510液相色谱常见问题及处理办法关于保留时间漂移问题：1.温度控制不好，解决方法是采用恒温装置；2.流动相发生变化，解决办法是防止其发生蒸发、反应等3.柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于保留时间发生快速变化：1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之稳定2.泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。3.流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合111.拆去保护预柱，看柱压是否

8、还高；2.把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗；3.将柱子的进出口反接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗，此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池；4.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的