超声照射对人胚肾细胞凋亡的影响

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1、超声照射对人胚肾细胞凋亡的影响【摘要】目的了解诊断超声照射对体外培养的人胚肾(HEK293)细胞凋亡的影响。方法HEK293细胞用腹部超声探头(3.5MHz、MI0.8)照射0、10、20、30min，再作Hoechst33258染色，观察细胞凋亡的变化。结果超声照射10min后，细胞凋亡率与假照组比较差异无统计学意义(P>0.05);超声照射20min后，细胞凋亡率明显高于假照组(P<0.05)，其中以照射30min较为显著(P<0.01)。结论特定剂量的超声照射可诱导人胚肾细胞凋亡增加。【关键词】超声;凋亡;形态学　　Abstrac

2、t:ObjectiveToinvestigatetheeffectofdiagnosticultrasoundexposureontheapoptosisofhumanembryonickidney(HEK293)cells.MethodsHEK293cellswereexposuretoabdominalultrasoundprobefor0,10,20and30min,andtheirapoptosiswasdetectedbyHoechst33258staining.ResultsComparedwithcontrolgroup,apoptotic

3、rateofHEK293cellsincreasedsignificantlyafter20minexposure(P<0.05),especiallyafter30minexposure(P<0.01).However,therewasnostatisticaldifferenceinapoptoticratebetween10minexposuregroupandcontrolgroup(P>0.05).ConclusionThedoseofdiagnosticultrasound9exposurecaninducetheap

4、optosisofHEK293cells.　　Keywords:ultrasound;apoptosis;morphology　　超声应用于产科，可以推算胎龄、诊断先天畸型及了解胎儿宫内发育情况，它能为胎儿、胚胎甚至正在发育成熟的卵泡提供一个清晰的图像，同时也需要更高的超声输出功率。随着孕前卵泡检测和产前检查越来越细致和精确，超声运用的频率、时间、输出功率也在不断增加，敏感的胚胎组织及生殖细胞受到的威胁也随之加大。人们对超声使用的安全性也越发关心。有关产科超声的安全性，目前尚无统一定论，更无具体的辐照剂量可引起哪方面的影响这样的规律可循，孕期超声检查只能尽

5、可能地使用最低剂量。这使超声的产前检查安全性的遵循原则带有盲目性，或者引起因不了解超声的安全范围而滥用超声，为产前检查带来隐患。要明确知道产前超声的安全范围还需要一个漫长的过程，本实验拟探讨超声近距离辐照对体外培养细胞凋亡形态学改变的影响，为产前超声的安全使用提供一定的理论依据。　　1材料和方法　　1.1试剂　　Hoechst933258购自美国Sigma公司，DMEM培养基购自美国Gibco公司，胎牛血清(FBS)购自杭州四季青生物工程公司，胰蛋白酶购自美国Gibco公司，其余试剂为国产分析纯。HEK293细胞株由广东医学院生化教研室提供。1mgHoec

6、hst33258溶解于10mLPBS中，配成100mg/L的10×Hoechst33258储存液，密封避光，4℃短期保存。　　1.2仪器　　MCO15ACO2细胞培养箱(日本SANYO公司)，YJ875DA医用净化工作台(苏州净化设备厂)，IMTI型荧光显微镜(日本OLYMPUS公司)，Vivid7彩色多普勒超声诊断仪(GE公司)。　　1.3细胞培养与处理　　HEK293细胞采用常规培养方法，无血清饥饿培养调整细胞周期一致后进行实验。将细胞分成超声照射0、10、20、30min组，空白组予以假照，腹部探头产科诊断条件(3.5MHz、MI0.8)，介质

7、为细胞培养液(主要成分为DMEM培养基)，辐照距离<1cm，处理后继续培养24h后检测。　　1.4细胞染色与观察　　收集处理后的细胞，PBS洗涤离心2次后取10μ9L细胞悬液滴于盖玻片上，加1mL固定液(甲醇∶冰乙酸3∶1)，4℃固定5min，弃去固定液，用PBS洗两遍，吸尽液体。加入1mLHoechst33258工作液(10mg/L)，摇床轻摇，染色10min，弃去染色液，用荧光显微镜避光拍照，激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。　　1.5结果评判　　细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状或呈折缝样，部分染色

8、质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化