双基因活化的骨软骨组织工程复合体的构建

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1、目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．1Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3第一章综述⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61．1组织工程61．1．1组织工程的定义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61．1．2组织工程的要素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61．2骨软骨1．2．1骨软骨结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．2．2软骨下骨的生理功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1

2、31．2．3骨软骨的损伤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141．2．4骨软骨缺损的自发修复⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141．2．5深层骨软骨缺损的医学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151．3骨软骨组织工程研究进展171．3．1支架策略1：成骨支架和无软骨支架⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．171．3．2支架策略2：不同支架分别形成骨和软骨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．3．3支架策略3：异质整体双层支架⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。191．3．4支架策略4：均质整体双层支

3、架⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．191．4基因传输技术小结参考文献202223第二章MSC在TGF-[31活化的壳聚糖／明胶支架和删卜2活化的壳聚糖／明胶／羟基磷灰石支架上的生长⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．272．1实验材料和仪器2．2实验方法27282．2．1质粒DNA的扩增与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282。2。2原代兔骨髓间充质干细胞的分离与培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．2．3单层支架的制作和质粒活化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．2．4细胞种植和实验体外分组⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一．．

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯302．2．5支架的扫描电镜观察(SEM)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯302．2．6MSC在基因活化材料上的生长增殖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．302．3结果312．3．1MSC的提取与培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一312．3．2支架形态⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯312．3．3MSC在支架上的依附⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322．3．4MSC在基因活化支架上的生长⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322．4实验讨论参考文献333

5、5第三章船c在TGF-ffl活化的壳聚糖／明胶支架和B]I肛)-2活化的壳聚糖／明胶／羟基磷灰石支架上的分化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．363．1实验材料3．2实验方法373．2．1双层培养复合物的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯373．2．2双层体系中中TGF-B1和BMP一2蛋白因子的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯383．2．3real—timePCR检测GAM上MSC骨软骨分化相关基因的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯383．2．4基因活化材料的包埋和切片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393．2．5双层培养复合物的HE组织学检测⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．393．2．6双层培养复合物的免疫组化检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯403．3结暑巳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯403．3．1双层体系中TGF_B1和BMP一2蛋白因子的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯403．3．2双层体系中中骨软骨相关基因的mRNA水平的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。413．3．4双层培养复合物的免疫组化检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯423．4讨—i譬⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45第四章双基因活化的双层支架修复兔关节骨软骨缺损的体内试验464．1实髦b}jI料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·464．2实验方法474．2．1基因活化的双层复合物的构建及体内试验的分组⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯474．2．2兔膝关节骨软骨缺损模型构建及修复实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯474．2．3兔膝关节标本取材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯484．2．4组织标

8、本的包埋和切片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯484．2．5修复缺损部位的组织学检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯484．2．6免疫组织化学检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯