贝类嗅觉基因的鉴定与同源性研究

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1、摘要摘要嗅觉是动物对挥发性物质的感受过程。嗅质分子、嗅质结合蛋白以及嗅质受体是完成嗅觉感受最初阶段的三个要素。嗅质分子～般为小分子挥发性物质，需要先与嗅质结合蛋白结合以助溶，再与受体结合，通过与其他视觉等类似的过程在嗅觉神经元中引起电信号。该电信号传至中枢神经系统，产生嗅觉。嗅质受体编码基因数目庞大，其假基因化程度与物种生存对嗅觉的依赖程度存在一定关系。本实验以实验室培养的贝类模式动物m玩aspersa成体为研究材料，应用SMARTcDNALibraryConstruction技术，通过提取总RNA，反转录合成cDNA，LD．PCR扩增cDNA，筛选，插入片段

2、至载体A,TriplEx2，再经体外包装，构建了该模式动物的cDNA文库，经平板培养及蓝白斑筛选检测，未扩增文库滴度达到1．22x106pfu／mL，扩增文库滴度达到5．6×109pfu／mL，重组率达到96．43％以上，通过cDNA文库，克隆，分离并测序了与嗅质受体相关的基因，再与其他已知嗅质受体一起构建系统发育树，推测其嗅觉基因在整个嗅觉基因演化过程中的进化方向与进化距离。关键词嗅觉嗅质受体假基因化软体动物SMART技术cDNA文库AbstractTheolfactionistheprocessinwhichananimalperceivesthevola

3、tilesubstances．Odorant,odorantbindingproteinandodorantreceptorareessentialintheinitiallyprocessofthesensation．Odorant，usuallyvolatileswitlllowmolecularweight，bindsodorantbindingproteinbeforecomplexwithreceptor,thenarousestheelectronicsignalasintheprocessofvision．Theolfactionisformed

4、aftertheelectronicsignalistransferredtotheCNS．Themembersofodorantreceptor-codinggenesformthelargestgenefamilyasknown．Theanimal’Ssurvivalrelieslessontheolfactoryandaccordinglypseudogenizationincreases．IconstructedaeDNAlibraryofthedomesticsnailwithClontechSMARTeDNALibraryConstructionK

5、it．WiththetotalRNAextractedusingtheInvitrogenTrizol，first-strandeDNAsynthesized，andwithfirst-strandcDNAamplifiedwithLongdistancepolymerasechainreaction(LD—PCR)，thedseDNAwasdigestedbySfiIandfractionatedbyCHROMASPIN-400column，beforeligatedtoLTriplEx2vectorandpackaged．Titeringandblue／w

6、hitetestsshowedthetitteroftheunamplifiedandtheamplifiedwere1．22×100pfu／mLand5．6×10ypfu／mL，respectively．Therecombinantpercentagereached96．43％．FromtheeDNALibraryconstructed，Iclonedrandomlyselectedgenesinwhichseveralwerethoughttobemosthomological、以tllthoseconfirmedorpredictedolfactoryg

7、enes．TheirpossiblefunctionWasindicatedbythewellnestingintheevolutionaryphylogramswitholfactorygenesterminalsfromplants，nematodes，insects，andsomevertebrates．KeywordsOdorantreceptorPseudogeneMolluscaSMARTeDNAlibraryH河北大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注

8、和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经